具体步骤如下:
(1)在一个培养皿中并列放两块载玻片(两块载玻片之间留有间隙)，将融化并冷却至45 - 50℃的PDA培养基倾倒在载玻片上，在每块载玻片[都制成厚度约2~ 3mm的平板培养基;用接种针从待鉴定菌种的菌落上取菌丝体分别接种到每块平板培养基的中部;盖上培养皿的盖，将其置于18^20℃的培养箱中培养;当待鉴定菌种在上述平板培养基上长出的新菌落半径达1~1. 5cm时，即可用于以下步骤的鉴定;
(2)将步骤(1)所述培养皿中的一块承载有待鉴定菌种菌落的的载玻片取出，用擦镜纸将载玻片下而(无培养基的一面)擦净，在菌落边缘处滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片，用吸水纸从盖玻片边缘吸去多余的水;
(3)将上述载玻片置显微镜下观察，以培养基表面菌丝的形态特征作为判断是否为羊肚菌的重要依据;若观察到的培养基表面菌丝具有羊肚菌培养基表面菌丝的形态特征，可初步判断该菌种为羊肚菌菌种。
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