产肠毒素大肠埃希氏菌的培养条件与注意事项！
小杨 / 2022-01-19 09:06:27
产肠毒素大肠埃希氏菌是Escherichia属的微生物，原产地为中国。革兰氏阴性杆菌。含热不稳定性肠毒基因(lt或elt) 和人源热稳定性肠毒素基因(stIb或estIb)。主要用途为研究，具体用途为《GB/T 4789.6-2003致泻大肠埃希氏菌检验》阳性对照菌株。
一、菌种简介
平台编号：Bio-56692
提供形式：冻干物
拉丁属名：Escherichia Coli ETEC O78：K80
中文名称：产肠毒素大肠埃希氏菌
属名：Escherichia
种名加词：coli ETEC O78：K80
来源历史：←中国检验检疫科学研究院(10159) ←沈阳出入境检验检疫局
收藏时间：2010.7.14
原始编号：D16
资源归类编码：15131122101
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究；分析检测
具体用途：研究、质量控制。
特征特性：G-杆菌，精氨酸双水解酶阴性，赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，尿素酶阴性，IMViC实验：+、+、-、-；不产H2S，发酵阿拉伯糖、山梨醇、甘露醇，不发酵蔗糖、肌醇。兼性厌氧，最适pH7.4~7.6。血清型：O78：K80。
生物危害程度：三类
致病对象：人畜共患
传播途径：经口、消化道
分离基物：胸肉
采集地：辽阳
培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。
培养温度：37℃
资源保藏类型：培养物
保存方法：真空冷冻干燥法
实物状态：有实物
共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享
用途：研究；分析检测；研究、质量控制。
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、储存条件
冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80°C
三、培养条件
1、培养基编号：CM0002 营养肉汁琼脂或者 LB 培养基
2、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。
3、需氧类型：好氧
4、培养温度：37℃
四、注意事项
1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。
3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。
4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。
5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。
五、打管说明书
1、西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.2ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。
2、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。
4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。
5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。冻干管打开后需一次用完，不能留存。
6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。
7、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。
8、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。
9、甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。