质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，保质期90天，请务必先转化提质粒后使用）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
7、常用抗生素推荐浓度：
简称中文名称溶剂储存浓度大肠工作浓度备注
Amp氨苄青霉素ddH2O 100mg/ml 100μg/ml 0.22µm过滤除菌
Car羧苄青霉素ddH2O 50mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌
Kan卡那霉素ddH2O 50mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌
Spe壮观霉素ddH2O 50mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌
Gen庆大霉素ddH2O 50mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌
Apr安普霉素ddH2O 50mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌
Zeo博来霉素ddH2O 100mg/ml 100μg/ml 0.22µm过滤除菌，低盐高PH的培养基
Blast杀稻瘟菌素ddH2O 10mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌，低盐高PH的培养基
Hyg潮霉素ddH2O 50mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌
Chl氯霉素无水乙醇50mg/ml 50μg/ml松弛型质粒可以提高到170μg/ml
Str链霉素ddH2O 50mg/ml 50μg/ml 0.22µm过滤除菌
Tet四环素无水乙醇10mg/ml 10μg/ml培养基不能含镁离子
Rif利福平DMSO 50mg/ml 50μg/ml一般用于农杆菌
Erm红霉素无水乙醇200mg/ml 600μg/ml大肠杆菌对红霉素不敏感
简称中文名称哺乳细胞工作浓度
G418遗传霉素100—1000ug/mL
Puro嘌呤霉素1-10μg/mL
Hyg潮霉素50-500μg/mL
Zeo博来霉素50-1000µg/mL
Blast杀稻瘟菌素1-50μg/mL