跟百欧博伟生物一起了解稳定细胞株的服务流程!
小吴 / 2020-11-30 17:14:47

      跟百欧博伟生物一起了解稳定细胞株的服务流程!

     稳定细胞株是人为的将目的基因或感兴趣的片段整合到宿主细胞的基因组,可以稳定的传代不会降解丢失的细胞,适合稳定大量表达各种外源蛋白。其一般是将外源DNA克隆到具有某种抗性或选择基因的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中,用载体中所含的选择标志进行筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白的细胞株。

    稳定细胞株指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。它的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。其包括多克隆稳定细胞株和单克隆稳定细胞株。慢病毒感染目的细胞后,通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细胞中经细胞克隆挑选得到的,由一个细胞扩增得到的细胞株。单克隆细胞株性状统一,传代过程中细胞的基因表达保持稳定。
    稳定细胞株服务流程:
    a、载体构建:将外源基因构建到合适的载体上。
    b、细胞筛选浓度测定:以10-14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
    c、细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到60%-80%覆盖。
    d、细胞转染:用构建好的载体转染目的细胞。
    e、使用抗生素对细胞进行筛选。
    f、筛选结果鉴定。
    稳定细胞株应用:
    稳定持续地生产目的蛋白
    构建符合法规要求的无血清培养细胞株
    表达具有活性的大分子量多聚体蛋白,此类蛋白通常需要复杂的翻译后修饰,如糖基化和二硫键连接等。

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