人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
小杨 / 2020-07-15 08:56:24
一、细胞简介
平台编号：bio-83898
拉丁属名：NK-92MI
细胞名称：NK-92MI（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）
种属：人
年龄（性别）：男；50岁
生长特性：悬浮
组织来源：恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
细胞形态：淋巴母细胞样
背景描述：NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体，其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测，结果都呈阴性。
生长培养基：MEMα(货号:PM150421)＋1.5g/L NaHCO3＋43.2mg/L Inositol＋8.82mg/L Folic Acid＋7.8mg/L β-mercaptoethanol(货号:PB180633)＋12.5% HS(货号:164215-100)＋12.5% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用
运输方式：复苏细胞常温运输/冻存细胞干冰运输
二、NK-92MI（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）传代方法
1、用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；
2、待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；
3、传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
三、NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)注意事项
1、该细胞对培养基质量要求高，建议使用新鲜的专用培养基。
2、推荐以2x10^5个/mL-1x10^6个/mL的密度培养细胞。
3、该细胞培养时聚团生长，分散的单个细胞活性会降低，若细胞团块过大过多，应当轻轻将其吹散成小细胞团。
4、该细胞的活性受离心影响较大。尽量少离心。复苏时，冻存液融化后，建议直接缓慢滴加10mL完全培养基，竖直放置T25瓶培养。每2天一次半量换液，将细胞悬液吸至15mL离心管，竖直静置2-3h，待细胞团基本都下沉之后，小心地吸取上半部培养基弃去，加入新鲜培养基。第一次传代时则需要弃去绝大部分培养基，可使用500r/min离心3min以使细胞团下沉再小心弃去绝大部分培养基。
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