SW-13人肾上腺皮质癌细胞的应用！
小杨 / 2020-06-24 08:35:06
一、背景
SW-13人肾上腺皮质癌细胞是1971年8月从55岁的患有肾上腺皮质癌的白人女性患者中分离建立的细胞系。该患者的病理诊断为Ⅳ级肾上腺皮质原发性小细胞癌。电镜显示，该细胞有许多球形缝隙连接(BGJ)。肾上腺皮质是构成肾上腺外层的内分泌腺组织。它能分泌由数种类固醇混合而成的肾上腺皮质激素，皮质内还含有为数更多的类固醇。
肾上腺皮质由3层构成，最外层为球状带（zona glomerulosa），接着为占大部分的束状带（zona fasciculata），内层为网状带（zona seticularis）。其功能异常可以引起肾上腺皮质功能亢进、肾上腺皮质功能减退、肾上腺皮质增生等。
肾上腺皮质（adrenal cortex）球状带分泌盐皮质类固醇，束状带分泌糖皮质类固醇，网状带分泌肾上腺性激素。脑垂体前叶的促肾上腺皮质素具有促进肾上腺皮质的发育和分泌的作用，但球状带的活动则受血管紧张素Ⅱ的支配。肾上腺皮质通过这些激素的分泌，对物质代谢有重要关系，特别是参与机体对一切有害刺激的应激反应。另外，肾上腺皮质激素对脑及脑垂体都具有反馈作用，从而可调整促肾上腺皮质素释放因子和促肾上腺皮质素的分泌。这样，肾上腺皮质的调节系统便形成反馈回路。
二、人肾上腺皮质癌细胞的应用
用于PCAF-siRNA对肾上腺皮质癌SW13细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响研究：
收集肾上腺皮质癌、肾上腺皮质腺瘤及正常肾上腺组织患者临床病理组织切片,探索检测PCAF与EMT相关蛋白、Wnt通路关键蛋白β-catenin在肾上腺皮质肿瘤当中表达情况及相关性。利用小分子干扰RNA(siRNA)靶向抑制肾上腺皮质癌SW13细胞中PCAF基因表达,进而在体外细胞及分子水平探讨PCAF在肾上腺皮质癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响及作用机制。
对人PCAF基因设计合成3对候选siRNA序列,根据RNA干扰技术利用转染试剂Lipo 2000将其瞬时转入体外培养的肾上腺皮质癌SW13细胞中,荧光显微镜下观察转染效率,确定最优转染条件,qRCR检测3对候选siRNA序列对PCAF基因表达的抑制作用,并筛选出最有效的siRNA序列。
利用筛选出最有效的PCFA-siRNA瞬时转染肾上腺皮质癌SW13细胞,并确定分组实验组(PCAF-siRNA),阴性对照组(NC-siRNA)以及空白组,免疫细胞化学染色方法检测各组细胞内β-catenin蛋白的位置分布,IPP软件对免疫化学染色光密度进行分析。qPCR检测各组间β-catenin的表达,Western blot方法验证转染后PCAF蛋白表达,并通过对各组SW13细胞总蛋白及核蛋白的分别提取,检测β-catenin在各转染组的表达差异。双荧光素酶报告基因实验检测各组间报告强度,验证经沉默PCAF表达后是否影响SW13细胞Wnt/β-catenin通路的活性。利用RNA干扰瞬时转染的各分组SW13细胞,即：实验组(PCAF-siRNA),阴性对照组(NC-siRNA)以及空白组,Western blot及qPCR检测各组SW13细胞Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因：c-myc、Cyclin D1、CD4、VEGF、MMP-7、PPAR-γ等的表达差异。
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