副溶血性弧菌的定性与定量检测以及确定鉴定
一、定性检测
将5.1.3制备的1:10样品匀液于36℃±1℃培养8 h~18 h。
二、定量检测
用无菌吸管吸取1:10样品匀液1 mL，注入含有9 mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水的试管内，振摇试管混匀，制备1:100的样品匀液。
另取1 mL无菌吸管，按5.2.2.1操作程序，依次制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用一支1 mL无菌吸管。
根据对检样污染情况的估计，选择3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3支含有9 mL 3% 氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种1 mL置36℃±1℃恒温箱内，培养8 h〜18 h。
三、分离
对所有显示生长的增菌液，用接种环在距离液面以下1 cm内沾取一环增菌液，于TCBS平板或弧菌显色培养基平板上划线分离。一支试管划线一块平板。于36±1℃培养18 h〜24 h。
典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似口香糖的质感，直径2 mm〜3 mm。从培养箱取出TCBS平板后，应尽快（不超过1 h)挑取菌落或标记要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。
四、纯培养
挑取3个或以上可疑菌落，划线接种3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃±1℃培养18 h〜24h。
氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。
涂片镜检：将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色，镜检观察形态。副溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。
挑取纯培养的单个可疑菌落，转种3%氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层，36℃±1℃培养24 h 观察结果。副溶血性弧菌在3%氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。
嗜盐性试验：挑取纯培养的单个可疑菌落，分别接种0%、6%、8%和10%不同氯化钠浓度的胰 胨水，36℃±1℃培养24 h，观察液体混浊情况。副溶血性弧菌在无氯化钠和10%氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在6%氯化钠和8%氯化钠的胰胨水中生长旺盛。
五、确定鉴定
取纯培养物分别接种含3%氯化钠的甘露醇试验培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、MR-VP培养基， 36℃±1℃培养24 h~48 h后观察结果；3%氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物进行ONPG试验可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
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