一、菌种简介
平台编号：bio-82275
规格：冰袋泡沫盒快递
菌株名称：origami 2(DE3)
中文名称：Origami 2(DE3) 感受态细胞
菌株类型：E.coli
培养基：LB培养基
生长条件：37 ℃, 有氧
基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139ahpC galE galK rpsL F′[lac+ lacIq pro] (DE3) gor522::Tn10trxB (StrR, TetR)
抗性：链霉素，四环素
质粒转化条件：42 ℃热激
应用：蛋白表达, 含二硫键蛋白表达
诱导方法：IPTG
货期：款到1-3出库
运输：冰袋泡沫盒快递
培养方式：LB,37℃
保存：1ml甘油管，-80℃
二、菌株特点：
Origami 2系列感受态细胞是K-12细胞的衍生而来，在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。
与Origami系列感受态相比，Origami 2系列感受态细胞是卡那敏感的，这使得该菌株能够适用于大多数的Novagen公司的蛋白表达质粒。Gor基因突变使得该菌株和原来的Origami(DE3)菌株一样具有四环素抗性。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。
亮氨酸生长缺陷型宿主菌。
三、Origami 2 (DE3)感受态细胞TOP10感受态细胞操作说明书：
1、TOP10感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目 的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2、42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3、向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4、5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5、将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13h。
四、TOP10感受态细胞注意事项：
1、感受态细胞最好在冰上融化。
2、混入质粒或连接产物时应轻柔操作。该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
3、转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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