HCT 116(人结肠癌细胞)培养方法及应用!
小杨 / 2020-02-27 09:27:51


HCT116是1979年M.Brattain等从患结肠癌的男性病人中分离的三株恶性细胞之一。 在半固体琼脂糖培养基中形成克隆。HCT116在无胸腺的裸鼠有致瘤性,形成上皮样的肿瘤。

一、细胞简介
平台编号:bio-73037
规格:5×10?cells/T25培养瓶
拉丁属名:HCT 116
细胞名称: HCT 116(人结肠癌细胞)
种属: 人
年龄(性别): 男;成年 组织来源 结直肠癌
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
背景描述: HCT 116细胞是由M·Brattain等人于1979年从患结肠癌的男性病人中分离的三株恶性细胞中的一株。HCT 116细胞在半固体琼脂糖培养基中形成克隆;HCT 116细胞在无胸腺裸鼠有致瘤性,形成肿瘤结节。
生长培养基 :McCoy’s 5A(货号:PM150710)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:PB180120)
培养条件: 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃
用途:提供用于科研的稳定细胞系。
运输:冻存的细胞干冰运输,复苏的细胞冰袋运输。
说明书下载:HCT 116.pdf

二、HCT 116(人结肠癌细胞)培养条件:
1、培养基:RPMI-1640培养基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%双抗+800ng/ml Taxol
2、温度:37.0°C
3、气体:空气 95%,CO2 5%

三、HCT 116(人结肠癌细胞)培养方法:
收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:
如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。
如果细胞已长满(达80-90%)。即可进行传代,具体步骤如下:
1、弃去培养液,用PBS洗1-2次。
2、向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培养液,轻轻吹打细胞。
3、加入等量的的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养
4、传代比例:1:2-1:3
温馨提示:培养瓶里面的培养液是加入最高药物浓度的,为800ng/ml。我们采取缓慢增加药物的梯度的方法。具体步骤是,首先加含200ng/mlTaxol药物的培养液,放入培养箱,这段时间会有小部分细胞悬浮起来,属于正常情况,通过换液可以去掉,等细胞待长满就可以消化传代了,这时可以一直用含药物培养液来消化培养细胞,一两代之后就可以将药物浓度提高到500ng/ml,两代后可以将药物浓度提高至最高水平800ng/ml,含药物培养液用于细胞培养都没有问题,冻存的时候就不要在冻存液里加药物了。

四、HCT 116(人结肠癌细胞)保存和应用:
客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜原代细胞,客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。如是冻存细胞,客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。

五、HCT 116(人结肠癌细胞)复苏的原则:
在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。

如何选购优质的HCT 116(人结肠癌细胞)
1)该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。 
2)收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
3)仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
4)用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
5)请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件:建议直接购买我司提供的完全培养基。
6)建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通交流。

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