关于进口化妆品洋葱伯克霍尔德菌的检验方法！
小杨 / 2020-02-10 09:13:16
洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia,BC)曾名为洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia),因引起洋葱球茎腐烂而得名,1993年改为现名。
一、生物学特性：
洋葱伯克霍尔德菌为革兰阴性杆菌，对营养要求不高，一般在普通培养基生长良好,最适合生长温度为30℃，在4℃不生长，42℃生长不定。
二、分布范围：
洋葱伯克霍尔德菌存在于土及水中,在医院环境中常污染自来水体温计喷雾器、血管导管、导尿管、静脉输液器等，因而可多种医院内感染,包括败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、脓肿、眼结膜炎等，是条件致病菌。其细胞膜的不通透性使其对大多数抗生素产生耐药，在医院易引起暴发流行，是医院感染的重要病原菌之一。
三、检验流程：
根据SN/T4684-2016进出口化妆品洋葱伯克霍尔德菌检验方法规定，检验流程如下：
四、典型菌落特征：
含多粘菌素B、庆大霉素的BCSA琼脂：红色圆形菌落，表面光滑，周围培养基变红
含多粘菌素B、庆大霉素的麦康凯琼脂：浅黄褐色圆形菌落，表面光滑，周围培养基不变色
五、生化鉴定：
1、葡萄糖氧化实验：
挑取可疑菌落，接种于2 支葡萄糖发酵管，其中一支加灭菌液体石蜡封口，另一支不封口，36℃土1℃，24h。二者均变黄为葡萄糖发酵型，未加石蜡管变黄而加石蜡管不变色为葡萄糖氧化型。
选择葡萄糖氧化型，在营养琼脂平板上划线纯化培养，36℃士1℃，24 h。纯培养养物继续进行鉴定。
2、革兰氏染色：
挑取可疑菌落涂片，进行革兰氏染色。显微镜镜下观察，洋葱伯克霍尔德菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌。
3、氧化酶试验：
用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸平板上。洋葱伯克霍尔德菌为迟缓型氧化酶阳性（紫红色、紫色、或深蓝色），反应时间约为2min - 10min。
注：实验中切勿使用镍/铬材料
4、过氧化氢酶实验：
用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，置于洁净室管内，滴加3%过氧化氢溶液（临用时配置）2ml,观察气泡产生情况。洋葱伯克霍尔德菌为迟缓产气，1s后出现气泡。
5、蔗糖氧化实验：
挑取可疑菌落接种于蔗糖氧化培养基上，36℃±1℃，24h。培养基变黄色为阳性，蓝色为阴性。洋葱伯克霍尔德菌为阳性反应。
6、枸橼酸盐利用：
挑取可疑菌落接种于西蒙氏枸橼酸盐培养基，36℃±1℃培养24h，培养基变蓝色为阳性，浅绿色为阴性。洋葱伯克霍尔德菌为阳性反应。
7、七叶苷利用：
挑取可疑菌落接种于七叶苷培养基，30℃士1℃培养 24 h ，培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。洋葱伯克霍尔德菌为阳性反应。
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