百欧博伟生物 人成骨肉瘤细胞 well5
小杨 / 2019-11-23 09:09:00
平台编号：bio-106287
拉丁属名：人成骨肉瘤细胞
英文名称：well5
规格：1ml/T75
作用：科研使用，不可应用于治疗等其他方面
保存条件：4℃保存一年;-20℃长期保存
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
人成骨肉瘤细胞well5操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
细胞接收后的注意事项
1.细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。
2.如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。
3.贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。
4.生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。
细胞常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）
1. 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2~3 ml 0.25% EDTA 的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在 1~2min）。
2. 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加 6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。
3. 取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。
4. 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液，待细胞密度达到 70-80%时重复传代操作或者冻存。
说明书下载：人成骨肉瘤细胞;well5
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