葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。试管法凝固酶试验称为葡萄球菌凝固酶，玻片法为检测凝聚因子。
1．凝聚因子试验：
取1滴蒸馏水于洁净的玻片上，用接种环挑取待检菌一环置于蒸馏水中，制成浓的菌悬液，无自凝现象。然后加一环家兔血浆混合，10s内观察结果，出现明显细菌凝块为阳性，否则为阴性。如超过 10s可出现假阳性，有10％一15％金黄色葡萄球菌呈假阴性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。
操作过程中的注意点：
10s内观察结果。
必须制备浓厚的均匀菌悬液。
用EDTA抗凝的兔血浆为最好。
加血浆后不要再混搅，以免细菌凝块分散变小。
生长在高盐培养基上的菌落可出现自凝或假阳性。
2．葡萄球菌凝固酶试验：
用生理盐水将血浆4倍稀释，取0.5ml。然后挑取3～5个菌落于稀释血浆中，成浓菌悬液。置37℃水浴，3～4h后读取结果，凝固者为阳性。若阴性，继续观察到24h，不凝固者为阴性。试验应同时作阳性、阴性对照。
试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝固，应判为阴性。中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时间孵育，才可出现阳性。
凝固酶试验应考虑下述情况：
某些金黄色葡萄球菌产生溶纤维蛋白酶，溶解纤维蛋白凝块。
所用血浆缺乏纤维蛋白原。
试验菌株不纯。
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