一、原理
使培养液中微生物的生理状态比较一致,生长发育处在同一阶段的培养方法称同步培养法。同步培养的方法很多,最常用的有选择法和诱导法两种。
(一)选择法
选择法是通过过滤、密度梯度离心、膜吸附和直接选择等方法,从细胞群体中选择处于同一生长发育阶段的细胞来进行培养的方法。
⒈离心沉降分离法 处于不同生长阶段的细胞,其个体大小不同,通过离心就可在一定程度分开,然后用同样大小的细胞进行培养便可获得同步培养。
⒉过滤分离法 用孔径不同的微孔滤膜可将大小不同的细胞分开,刚分裂的幼龄菌体较小,能通过滤孔,其余菌体留在滤膜上面,将滤液中的幼龄细胞进行培养,就可得到同步培养物。
⒊硝酸纤维素薄膜法 先将菌液通过硝酸纤维素薄膜,由于细菌与滤膜带有不同电荷,所以细菌能吸附于膜上,翻转薄膜,再用新鲜培养液滤过培养,附着于膜上的细菌分离后的子细胞由于不与薄膜直接接触,及菌体本身的重量,加之附着着培养物液的重量,便下落到收集器内,短时间内用收集内的细菌接种培养,便可得到同步培养物。
选择法同步培养是在不影响曲体代谢下获得的,因而菌体的生命活动较为正常,但也有其缺点,一些微生物即使个体大小相同时,其发育阶段也可能不完全一致,这样的微生物不宜采用这种方法。
(二)诱导法
诱导法主要是通过控制环境条件如温度、营养物质等来诱导同步生长。
1.温度调整法 将微生物的培养温度控制在亚适温度一段时间,使其缓慢地进行代谢,但又不进行分裂。然后将培养温度提高到最适生长温度,大多数细胞就会同步分裂。
2.营养条件调整法 控制营养物的浓度或组成以达到同步生长。限制碳源或其他营养物,使细胞只能进行一次分裂而不能继续生长,从而获得刚分裂的细胞群体,然后再转入适宜的培养基屮.它们便进入同步生长。
诱导法除上述两种外还有其他方法,诱导法的缺点是会给细胞的正常代谢带来一些不利影响。
二、材料
黑曲霉斜面菌种.麦芽汁平板4个
三、方法与步骤
1.孢子悬液的制备 取数环孢子放入盛有50ml无菌水的三角瓶中(瓶内放玻璃珠若干)充分振荡,制成孢子悬液,孢子量约105个/ml。
2.用镊子取圆形无菌玻璃纸1张(与培养皿直径大小相似),放在麦芽汁平板上。
3.取孢子悬液0.1ml放在上述平板上,用玻璃涂布器涂布均匀,置于冰箱(4℃)2h然后取出,放入30℃温箱培养1h。同时设一对照,不经低温处理直接放入30℃温箱培养11h。
4.镜检 计算孢厂出芽率,并比较菌丝生长情况。
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