细胞铺板不均匀？了解这3种手法技巧后竟如此简单！
中国微生物菌种查询网 / 2019-04-12 08:41:49
为什么把细胞铺均匀就那么的难?那是因为你没有掌握好手法!
注意，是手法，学霸姐姐做了这么多实验，也是在无数次铺细胞不均匀的情况下，才知道还有手法这一说，一个简简单单的铺细胞也出来这么多门道。
什么米字法、十字法、螺旋法、还有摇板子要拿起来摇、 或者一定要放在台子上磨（那种板子与台子摩擦出来尖锐的声音...... 最后放进孵箱之前,还生怕几步路摇坏了才铺好的板子........
学霸姐姐也是这样过来的！不过大多数技巧其实并没有太大的用处，学霸姐姐自己总结了最实用的细胞铺板的3种手法技巧，有了这些手法，细胞铺均匀不是事儿！
首先，我们来看看细胞铺板不均匀的3种情况：
1，中间多，周围少
2，中间少，四周多
3，呈现一坨一坨的
这么多种不均匀的情况，到底该怎么拯救呢？我们一起来看看细胞铺板的三种手法：
手法一：均匀单层
要铺成那种很均匀的单层细胞，手法如下：
1，细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基，放入孵箱中放置10-20min。
2，在滴入细胞时，细胞板子与通风橱有一定的角度，沿着板壁的孔边缘滴入。
3，滴入后，呈“8”字方法摇晃5-8次。
4，置于水平台上，放置10-20分钟
5，放入孵箱。
在细胞铺板时，每一种板子的孔面积有多大，培养的液体量以及加入细胞量。
手法二：中间少，周围多
其实细胞铺板不一定都需要单个单个的那么均匀，比如，做免疫荧光时，学霸姐姐喜欢铺中间少，周围稍多的板子，
因为这个样子可以同时检测到单个细胞的形态，另外又可以照一点低倍的用作于统计，所有的细胞都在一个环境中。
特别说明一下：这里的多也只是相对于多，细胞也是单层的。
中间
周围
要铺这样的细胞样子，那铺细胞时要注意手法了：
1，细胞板子不需要提前用培养基润洗，直接从边上滴入混有细胞的培养基。
2，放置30s-1min后，前后摇晃5-8次。
3，放在水平台上静置2-5min。
4，放入孵箱。
手法三：中间多，周围少
学霸姐姐一般在提取蛋白或者提取RNA的时候有时会这样铺板，因为有些细胞刮刀不好用，没有办法刮到周围的，想要铺中间多，周围少的板子，手法如下：
1，细胞板子不需要提前润洗，从中间滴入进去后。
2，把板子朝一个方向顺时针或者逆时针旋转3-5圈。
3，水平台上静置2-5min。
4，放入孵箱。
给大家看看学霸姐姐做免疫荧光单个细胞的时候铺的板子：
总结一下：想要细胞铺板铺得好，背景知识很重要
其实在铺细胞的时候，你要准确的知道你所养的细胞的特性，比如：
1，细胞的名称，来源。
2，细胞的属性。
3，细胞分裂时间。
还有，最主要的是要搞清楚你的细胞的生长曲线，还要知道铺板后多久可以到达什么细胞密度。
如果你准确的掌握了你的细胞特性，那铺板是分分钟搞定的事情。
细胞铺板后，细胞状态不好怎么办？
如果出现这种情况，学霸姐姐建议你从以下几个方面考虑一下原因：
1，用来铺板的细胞状态本身就不好。
2，用来铺板的细胞传代次数太多，有些老化。
3，胰酶消化时间过长。
4，中和的血清量及时间不够。
5，支原体污染。
细胞铺板是一个经验积累的过程，你的手法也需要积极的改进，不要生搬硬套，也不要一味追求绝对的铺均匀，在实验过程中多思考细胞本身的特征和属性，出现问题积极解决即可。
好细胞是实验的关键——Procell细胞库，细胞行业标准引领者
作为华中最大的原代细胞库，武汉普诺赛拥有免疫细胞及干细胞、细胞系、完全培养基、无血清培养基、基础培养基、血清、转染试剂、胰酶等细胞培养及实验相关产品，还可以为各类科研机构提供符合GLP标准规范的免疫细胞和干细胞及相关的实验技术服务。
Procell所有人源细胞系均提供STR鉴定报告，并且还可提供免疫荧光/免疫组化鉴定报告及原代细胞分离报告和细胞生长过程图片，让你的实验全程无忧。
不再担心细胞黑身份，明明白白做实验的方法，你get到了没？
