噬菌体裂解法快速检测结核分枝杆菌的应用！
中国微生物菌种查询网 / 2019-01-18 09:26:45
传统经典的结核分枝杆菌(TB菌)培养、鉴别的检测方法操作繁琐、耗时,不能满足临床诊断的需要。笔者采用结核分枝杆菌噬菌体裂解法快速检测结核病患者标本中的结核分枝杆菌的有无,能快速为临床诊疗提供可靠的依据。
1 材料与方法
1.1 材料
结核分枝杆菌噬菌体裂解法试剂盒(FASTPlaqeTBTM)购自英国Biotec公司。
1.2 检测对象
150份结核菌标本源于本院已确诊为结核病的住院患者。
1.3 临床标本前处理
挑取2～5 ml痰液于50 ml无菌离心管中,加1倍体积的4% NaOH溶液液化,漩涡振荡、打散痰液,20 min后,离心15 min,4 000 r/min弃去上清液。加无菌液(C液)20 ml,重悬下层沉淀,离心15 min,4 000 r/min,弃去上清液。重复加入C液1 ml,重悬沉淀物,无菌条件下转移至反应管中。胸腹腔积液、脑脊液和尿液标本离心后弃去上清液,无菌条件下加入C液1 ml后转入反应管中。
1.4 培养基的制备
分别取噬菌体(D液)100 μl于阳性对照、阴性对照及标本中,轻轻摇晃,确保试管内容物位于试管底部,37℃孵育60 min。分别加入100 μl杀菌剂(F溶液)于阳性对照、阴性对照及标本中,充分混匀(确保杀菌剂与反应管内壁完全接触),置室温5 min后,分别加入5 ml培养液(C液)和1 ml指示细胞(E液)于阳性对照、阴性对照及标本中。上述混合培养物与5 ml已溶解冷却至(55±2)℃的琼脂溶液(G液)于培养皿中快速混匀。待凝固成型后,放37℃培养18～24 h,判读结果。
1.5 结果判定标准
培养皿中出现大小不等的噬菌斑,且≥20个/平皿,或许多噬菌斑相互融合成透明状判定为阳性;平皿中无噬菌斑出现或噬菌斑数量。