一起来看看血清使用中常见的六大问题分析!
中国微生物菌种查询网 / 2019-01-15 08:34:53

1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损   
       将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。
长时间储存在2~8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、纤粘蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。 建议血清应保存在-20℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 
2.血清中包含絮状沉淀,他们是什么,怎么处理?
       沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1~2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失.
3、如何避免血清中产生沉淀?
   (1)解冻血清时,随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。   
   (2)血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。   
   (3)勿由-20℃直接放置于37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。   
   (4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。   
   (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。   
   (6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
4、培养基中添加了血清和抗生素后,可以长期保存吗?
      一旦在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,尽量在1个月内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分可能在解冻后就开始降解。  
5、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?   
       在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好,反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
(5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。  
6、细胞培养中如何防止黑点生成?
(1) 尽可能地减少血清冻融次数;
(2) 培养基无需37℃水浴; 
(3) 培养基保持最佳PH值7.0~7.2;
(4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗; 
(5) 掌握细胞传代的最佳时机,细胞切勿生长过老。
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