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1. 透明圈检测法和平板涂布法的区别
① 透明检测法:采用在琼脂营养培养基中添加碳酸钙作为检测培养基,同时采用稀释2亿倍的样品菌悬液1毫升,与上述碳酸钙营养琼脂培养基混合,倾注平板的方法,计算在碳酸钙平板培养基中培养48小时,并产生乳酸钙透明圈的菌落,即为乳酸粪肠球菌活菌落的科学检测和计数方法。
② 平板涂布检测法:是国内同行普遍采用的检测方法,与透明圈检测方法的区别是,直接使用琼脂营养培养基作为检测培养基,不添加碳酸钙,其次,制作培养平板的方法是在已凝固的平板培养基上面,注入0.1毫升稀释适当倍数后的菌悬液,用无菌玻璃刮铲将菌悬液均匀地涂于琼脂表面(也叫涂抹平板计数法),再增培养48小时,长出菌数即算为乳酸菌;
可见,两种检测方法的区别有以下几个:
① 培养基有所不同:透明圈检测方法添加了碳酸钙,而平板涂布检测方法没有添加碳酸钙;
② 制作平板的方法有所不同:透明圈检测方法是采用样品菌液与呈溶解状态的培养基混合,倾注平板的方法;而平板涂布检测方法是采用在已凝固好的平板培养基上,注入0.1毫升样品菌液,用玻璃刮铲涂布的方法;
③ 最终长出来的菌落特征有所不同:透明圈检测方法长出的乳酸菌菌落周围有一圈明显的透明圈,透明圈越大,说明产乳酸能力越强;而平板涂布检测方法长出来的菌落周围没有透明圈,与普通细菌长出的菌落没有区别,无法直接鉴定是否是乳酸菌。
④ 最终还有一个区别,就是检测出来的结果上有区别,采用透明圈检测方法检测出来的结果,比采用平板涂布法检测出来的结果要少很多,几乎少了10%以上;
2.2 检测方法的科学性对产品判断至关重要
采用透明圈检测方法是最科学的检测方法,是最能反映出乳酸菌活性的方法,而目前国内比较普遍的检测方法是平板涂布法,并不能直接说明所长出来的菌落就是乳酸菌,也不能直接反映乳酸菌的活性如何;
用透明圈检测出来的乳酸菌的含菌量与价格是成正比的, 与产品是否包埋保护处理也是成正比的
含乳酸菌越高,价格越贵,但这一点还是次要的,更为重要的是:产品是否采用了包埋和保护技术,对乳酸菌产品来说是非常关键的,因为乳酸菌非常容易在运输保存和制粒过程中损失殆尽;有些产品虽然含菌量非常高,但却也很脆弱,容易失活,这也是没有意义的产品。
透明圈乳酸菌检测方法简述如下:
①、检测培养基:蛋白胨15g,牛肉膏5g,葡萄糖20g,氯化钠5g,碳酸钙10g,琼脂粉10g,水1000ml,115~121℃灭菌20min,灭菌后放置水浴52℃保温备用。
②、稀释方法:取1克样品放入添加99ml无菌水的带玻璃珠的250ml三角瓶中,摇床180rpm震荡30min,即为10-2样品溶液,再从中取1ml至添加99ml无菌生理盐水的三角瓶中,稀释至10-4,以此类推稀释至10-8,即稀释了1亿倍
③、倒制培养平板,从上述已稀释了1亿倍的乳酸菌悬液中取1ml,在无菌操作台上注入90mm培养皿中,再将已经灭了菌的保持在52℃水浴锅中的呈溶解状态的培养基,倒入15毫升左右于培养皿中,全部浸到培养皿,与菌悬液充分混合均匀(倒入培养基后,马上用手转动培养皿,转动几下,让其混合均匀),然后等其凝固再移入培养箱中培养,注意最后一步倒平皿必须在超净台无菌操作,以免杂菌污染。每次稀释均要换灭好菌的移液管。
④、培养条件:33℃恒温培养箱培养48~72h
⑤、培养完毕后,取出进行计数,因为是稀释了1亿倍,所以一个透明圈菌落代表1亿/克,如果有200个透明圈,则是200亿/克;注:对于我公司300亿/克的乳酸粪肠球菌产品,需要稀释2亿倍才行。