ATCC细胞传代中常见四大问题的原因及解决方法！
一：细胞消化后易聚团怎么办？
可能原因1： 在处理过程中死亡细胞中释放的DNA会展开并缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团；消化的过程可能过于粗暴（吹打的太用力，消化液太强或有毒性等）
解决方法：在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。更加轻柔的吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤
可能原因2： 细胞重新聚集
解决方法：如果细胞悬液无法及时处理，请尝试将细胞悬液放置于低温冰浴
可能原因3：细胞离心速度过大或时间太长
解决方法：使用更加轻柔的离心方法（125×g离心5min）
二：细胞活力较低怎么办？
可能原因1：消化操作过于粗暴（吹打的太用力，消化液太强或有毒性，离心速度过大或时间太长）
解决方法：参加前面相关内容
可能原因2：使用的平衡盐缓冲液的pH或渗透压有问题
解决方法：更换缓冲液
可能原因3：细胞在接种前处于高密度状态的时间过久
解决方法：在细胞接种前，将细胞置于碎冰上冰浴
可能原因4：培养液有问题
解决方法：使用建议配方的培养液，确保使用前加入所有添加物。由于目前商业化的培养液品种非常多，因此很容易误购一些缺乏关键成分如谷氨酰胺的培养液，购买和使用时需要注意。
三：细胞很难贴壁怎么办？
可能原因1： 消化液处理的太过破坏了细胞表面的黏附相关蛋白
解决方法：降低消化液中酶的浓度，减少消化时间或降低消化时的孵育温度
可能原因2：培养液中血清或黏附因子含量过低（常见于无血清培养液）
解决方法：添加黏附因子或使用蛋白包被的培养板（如胶原，多聚赖氨酸，明胶等）
可能原因3：消化液没有去除或失活
解决方法：添加特异性的酶抑制剂，或者将细胞悬液离心（125×g离心5min）然后更换培养液以去除消化酶
四：细胞难以消化怎么办？
可能原因1：消化液太弱了
解决方法：增加酶的浓度或添加EDTA。另外可以尝试在37°C进行消化以增强酶的活性
可能原因2： 培养液中含有抑制剂（例如血清为胰酶的抑制剂）可使消化液中的酶失活
解决方法：在加入消化液前，用DPBS将细胞多洗涤几遍
可能原因3： 细胞长满了并且很长时间没有得到及时处理，以至于细胞间连接非常紧密从而使消化液渗透不到培养容器与细胞的接触面
解决方法：在细胞达到完全汇合前进行传代
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