避免抗体污染或损伤的最佳保存方法?是什么?
中国微生物菌种查询网 / 2018-12-04 09:10:09

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保存温度和条件
       对于很多抗体而言,分装成小等份并存于-20度或-80度是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤,以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次,如有剩余,可将剩余物保存于4度。在收到抗体时,在10,000×g下离心20秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液,并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10ul;等份越小,储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
        在大多数情况下,收到抗体时在4度下保存一至两周,然后再冷冻进行长期保存是可接受的,但也许腹水液是例外,它是包含蛋白酶,因而应该尽快冻存。同样,遵照说明书上的建议是重要的。
特别注意:
酶偶联抗体不应冻存,而应保存于4度。冻融不仅影响抗体结合能力,还会降低酶活性。
无论偶联是荧光染料、酶还是生物素,偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用锡箔纸包裹。暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响,在实验的所有阶段都应避光。
IgG3同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势,应始终保存于4度。
用叠氮化钠防止污染
       为了防止微生物污染,可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02%(W/V)的终浓度。很多抗体已经包含这种防腐剂,所用浓度为0.02至0.05%。
不使用叠氮化钠的情形:
        如果用抗体染色或处理活细胞,或如果用抗体进行体内研究,一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。该抗菌剂也对大多数其他生物具有毒性:它阻断细胞色素电子传递系统。
         叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联,应在偶联进行前除去。偶联后,抗体可保存于叠氮化钠中,除此之外,0.01%硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。
         叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。IgG的分子量为150,000道尔顿(IgM为约600,000);叠氮化钠的分子量为65道尔顿。截留分子量为14,000道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。在保存于4度的磁性搅拌器上的烧杯中,每毫升抗体使用至少一升冷PBS并搅拌透析装置6小时。更换PBS两次,每次更换搅拌至少6小时。如有可能,所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。
冷冻/融化损伤
      重复冷冻/融化循环可使抗体变性,导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。
      保存于-20度对于大多数抗体是适合的;保存于-80度无明显优势。冰箱不能为无霜型。这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。出于相同原因,抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域,例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。
        有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50%的终浓度以防止冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于-20度。虽然这对于很多抗体是可接受的,但是在该保存条件下的抗体稳定性也需要考虑。不建议将包含甘油的溶液保存于-80度,因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染。如果加入甘油或冷冻保护剂,则应当小心操作,以得到无菌制备物。
        应避免抗体在稀释至工作浓度后在4度下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解,理想的浓度为1mg/ml或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损伤。对于打算进行偶联的抗体而言,由于稳定蛋白质会与抗体竞争,降低了偶联的效率,所以不应加入稳定蛋白质。
抗体保存指南:如果恰当保存和处理,大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。

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