一、瑞氏染料的组成及染色原理
瑞氏染料是由碱性染料美蓝和酸性染料黄色伊红组成，合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝-伊红）染料。
伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐，呈碱性，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。
瑞氏染料中的酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后，变成中性伊红化美蓝，如染液放置过久即可氧化而含有天青。美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
二、瑞氏染色液配制方法
瑞氏染液配制：
瑞氏染料：0.1g
甘油：1.5ml
甲醇：60ml
先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再研磨至细粉末，加入甘油和少量甲醇溶解，继续研磨至无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料完全溶解为止。摇匀，密封瓶口，室温避光保存。
新鲜配制的瑞氏染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青后方可使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青愈多，染色效果也就越好。一般储存3个月以上为佳。但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中加中性甘油的目的也是防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰，但使用的甲醇必须纯净。
甲醇是瑞氏染料的良好溶剂，在染色中甲醇还具有两种作用：
（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝与伊红在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
三、染色方法
1、取病料、血液或菌液涂片、自然干燥；
2、滴加瑞氏染液，染色3分钟，使标本被染色液中的甲醇所固定；
3、加等量pH6.4的磷酸盐缓冲液(也可用等量蒸馏水或超纯水代替PBS)，轻轻晃动玻片，均匀静置3-5分钟；
4、用蒸馏水冲洗、吸干、镜检。
5、染色结果：细菌染成蓝色，组织细胞胞浆呈红色，细胞核呈蓝色或紫色。
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