产气荚膜梭菌毒素检测和分子生物学诊断方法
中国微生物菌种查询网 / 2018-07-25 08:50:42

产气荚膜梭菌毒素检测
1、动物致死性试验:将肠道内容物稀释取上清攻毒小白鼠,观察小白鼠致死情况;
2、毒素中和试验法:是更佳准确的方法,提取的毒素与毒素抗体中和后攻毒小白鼠,若对照组死亡,中和组不死亡,则精确表明某型毒素致死;
3、卵磷脂水解试验法:α毒素能分解卵磷脂,产气荚膜梭菌所有型均能产生α毒素,能验证产气荚膜梭菌的存在。
这些较为常用的方法中,以毒素中和试验最为特异,但相对而言这些方法均较费时费力,且敏感性较低。
分子生物学诊断方法
      物科学技术的快速发展,一些分子水平上的检测方法在毒素检测上得到了普遍应用。Kadra等为了验证PCR的准确可靠性,用PCR方法对不同来源的产气荚膜梭菌及毒素进行分型验证,将90株产气荚膜梭菌用细菌生化试验等方法进行验证,然后用小鼠血清中和试验进行定型,再用PCR法扩增α、β和ε三种毒素基因片段,最后将两种定型方法鉴定的血清型进行验证,结果表明,两种方法定型一致。表明PCR法准确可靠,且比小鼠的血清中和试验节约成本,方便可靠。于晓霞等为了寻找一种快速、准确的方法检测产气荚膜梭菌毒素型,采用SDS-PAGE的方法,对不同的产气荚膜梭菌分离株所产的外毒素蛋白进行分子量测定,从而确定所产外毒素的种类,确定菌株型。Fach等首先研究了用聚合酶链反应(PCR)方法检测毒素,参考毒素其他杆菌的磷脂酶C基因,设计了保守区域的针对基因特异性的引物,用PCR法扩增除了基因片段与毒素基因内的序列完全一致,表明可以使用PCR方法检测毒素基因,从而验证细菌型。Warren等应用PCR方法对包埋在福尔马林里的含有产气荚膜梭菌的病料进行基因检测,扩增到了α、β和ε毒素基因,虽然产气荚膜梭菌已经死亡,但产气荚膜梭菌基因依然没有被破坏,因而PCR方法可以检测死亡产气荚膜梭菌的存在。

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