空肠弯曲菌复活说明(参考)
一、操作步骤
1.、用75%酒精棉擦拭安瓿管外壁，待酒精挥发后将安瓿管封口处于酒精灯火焰上烧热；
2、立即滴一滴无菌水于封口处，使安瓿管前端裂开，用镊子将裂开部分敲掉；
3、用无菌吸管吸取少量灭菌后的布氏肉汤液体培养基，缓慢加入至安瓿管中将干燥菌体全部溶解；
3、吸取溶解后的菌悬液全部转移至盛有4~5mL布氏肉汤液体培养基的试管中；
4、将试管放入OXIOD 2.5升厌氧罐中，同时打开OXIOD微需氧袋迅速放入厌氧罐中，盖子锁紧后放入37℃保温箱中进行培养。
二、注意事项
1、上述步骤均要求无菌操作，安瓿管打开后要尽快完成复活操作并进行培养，避免时间过久造成菌体死亡。
2、第一代菌种生长较缓慢，需培养2-3d。肉眼观察液体有浑浊或摇动后底部有些菌丝或代谢物生成。
三、所用试剂和容器
OXIOD2.5升厌氧罐，货号：AG0025A。
OXIOD微需氧袋，货号：CN0025A。
布氏肉汤培养基，货号：CM125，FBP浓原液现用现配。
培养基名称：布氏肉汤
培养基成分：胰蛋白胨 10.0g，蛋白胨 10.0g，葡萄糖 1.0g ，酵母浸膏 2.0g 氯化钠 5.0g，亚硫酸氢钠(NaHSO3) 0.1g，蒸馏水 1000mL。将各成分溶于蒸馏水中。121℃高压灭菌15min。最终pH7.0.。FBP浓原液：硫酸亚铁(FeSO4) 2.5g ，焦亚硫酸钠(Na2S2O5) 2.5g，丙酮酸钠(sodium pyruvate) 2.5g；将各成分溶于100mL蒸馏水中，经0.20μm滤膜过滤除菌，存于4℃。每100mL经灭菌的基础液中加1mL，混匀。（注：如实验需要可加入1号抗生素液和2号抗生素液）。1号抗生素溶液：万古霉素 0.75 g，三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐(trimethoprimlactate) 0.38g ，多粘菌素B 250 000 IU 将各成分溶于500mL蒸馏水中，经0.20μm滤膜过滤除菌。每100mL经灭菌的基础液中加1Ml。2号抗生素溶液：利福平(rifampicin) 0.2g，三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐 0.2g，多粘菌素B 200 000 IU，放线菌酮(actidione) 2.0g 。将各成分置200mL容量瓶中，加入95%乙醇50mL，振摇使溶解，加入蒸馏水至200mL。过滤除菌，每100mL经高压灭菌的基础液中加1mL。
培养温度：37℃
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