百欧生物提供贴壁细胞传代技术说明
中国微生物菌种查询网 / 2017-08-01 07:29:43
1.从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃；
2.用不含钙、镁的平衡盐溶液冲洗细胞（每10cm2培养表面积约2mL溶液）；从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液，以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次（注：冲洗步骤可去除可能抑制解离剂的作用的少量血清、钙和镁）；
3.从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加预热的解离剂；试剂量应足以覆盖细胞层（每10cm2大约0.5mL）；
4.轻轻摇晃容器，使试剂完全覆盖细胞层；吸出多余解离试剂，T25细胞培养瓶留200ul左右即可；
5.将培养容器在室温下孵育约2分钟（请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异）；
6.在显微镜下观察细胞解离情况；如果解离程度未达90%，可将孵育时间延长几分钟，每30秒钟检查一次解离情况；也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离；
7.细胞解离程度大于等于90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽；加入所用解离剂两倍体积的预热完全生长培养基；吹打细胞层表面数次，使培养基分散；
8.将细胞转移到15ml无菌离心管,中，以200×g的离心力离心3-5分钟（请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异）；
9.用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积细胞悬浮转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱（注：如果使用培养瓶，以便进行充分的气体交换，除非您使用得是通气式培养瓶和透气性瓶盖）。
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