质粒DNA提取实验
中国微生物菌种查询网 / 2017-06-14 14:34:52
前提
细菌繁殖步骤（挑单克隆，置于LB培养基中，置于37℃恒温摇床摇过夜，180-200rpm）。
一般市面上有很多试剂盒可供大家使用，大体步骤都差不多的啦~~我按照我所使用的试剂盒（AxyPrep中抽试剂盒）的步骤分享如下：
收集
1.50ml离心管收集过夜摇菌的LB培养液（此时可以做一下判断，如果液体未变浑浊，说明细菌并未繁殖成功，这样肯定难以提出DNA；如果液体浑浊，便说明细菌繁殖成功啦，可继续下面的操作）,6000g离心8min，弃上清。
裂解
2.加250μlBufferS1重悬细菌的沉淀，可以在涡旋仪上涡旋，使得沉淀全部重悬均匀，不留有小的菌块。
3.加250μlBufferS2，温和并充分地上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。此步骤不宜超过5min。
中和
4.加350μlBufferS3，温和并充分地上下翻转混合6-8次，12,000×g离心10min。
5.质粒DNA制备管插到负压装置的接口上。吸取步骤4中的离心上清并转移到制备管中，开启并调节负压至-20-30英寸汞柱，缓慢吸走管中溶液。
结合
6.加500μlBufferW1，吸尽管中溶液。
7.加700μlBufferW2，吸尽管中溶液；以同样的方法再用700μlBufferW2洗涤一次。
洗涤
8.将制备管置于2ml离心管（试剂盒内提供）中，12,000×g离心1min。
洗脱
9.将制备管移入新的1.5ml离心管（试剂盒内提供）中，在制备管膜中央加60-80μlEluent或去离子水，室温静置1min。12,000×g离心1min。
将Eluent或去离子水加热至65℃将提高洗脱效率。
10.最后去检测其浓度即可啦。