部分常用的细胞培养基配制方法
中国微生物菌种查询网 / 2016-02-16 10:08:26

 保藏中心细胞库建议使用背景资料上指定的培养基培养细胞系,部分常用的培养基配制方法罗列如下,培养基过滤除菌后应检测无菌状况,然后补加血清和双抗,双抗的使用浓度一般是终浓度100单位/mL培养基。当然,部分细胞可用其它培养基替代,每个实验室都有自己传统的培养基配制方法,我们提供的配制方法仅供参考。


1.消化液的配制:

①胰酶(1:250)  2.5 克

②EDTA-Na         0.3克

③NaCl            8.0克

④KCl             0.4克

⑤Glucose         1.0克

⑥Phenol Red      0.005克

⑦Water           1000 mL

磁力搅拌2-3小时,调pH 7.8-8.0,过滤除菌。

2.MEM  medium  (1L)

   ① MEM                     1瓶(代)

      Non-essential amino acids     10  mL

      丙酮酸钠                  0.11克

water                      800 mL

磁力搅拌2-3小时

   ②  NaHCO3                            2.0克

water                    200 mL

磁力搅拌1小时

①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。

3. RPMI 1640  medium  (1L)

① RPMI 1640                     1瓶(代)

      L-Glutamine                     0.11克

丙酮酸钠                       0.11克

water                          800 mL

磁力搅拌2-3小时

    ②  NaHCO3                            2.0克

water                    200 mL

磁力搅拌1小时

①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。


4. DMEM  medium  (1L)

①  DMEM                       1瓶(代)

 Glucose                       3.5克

water                          800 mL

磁力搅拌2-3小时

    ②  NaHCO3                            2.0克

water                    200 mL

磁力搅拌1小时

①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。


5. Grace`s  Medium

    Grace`s Insect Cell Culture Medium              1瓶(代)

        Yeast extract                                 3.3克

         Lactal albumen hydrolysate                    3.3克

         NaHCO3                                            0.35克

water                                     1000 mL

在15-30℃磁力搅拌4-5小时

用2N  KOH 调pH至6.5-6.6,过滤除菌。


 6.DMEM/F12 Medium

    ①  DMEM/F12                                  1瓶(代)

L-Glutamine                                  0.2克

丙酮酸钠                                     0.11克

water                                      800 mL

磁力搅拌2-3小时

②  NaHCO3                                             2.0克

water                    200 mL

磁力搅拌1小时

①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。


7. 部分常用的微生物检测培养基

7.1 Sabouraud dexrosebroth  (Difco 0382-01)  SDB

   Sabouraud powder    3.00g

   Distilled water       100ml    pH 5.6

   Dispense 3ml aliquots of broth into each of 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.


7.2 Brain heart infusion broth BHI (Difco 0037-01-6)

   Broain heart infusion powder   3.70g

   Distilled water               100ml     pH 7.4

   Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.


7.3 Thioglycollate medium THIO (Difco 0256-01)

   Thioglycollate powder     2.98g

   Distilled water            100ml        pH 7.1

   Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.


7.4  Trypticase soy broth TSB (BBL 01-162)

    Trypticase soy broth powder    3.00 g

    Distilled water               100ml    pH 7.3

    Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.

All medium are sterilized in an autoclave for 20 min at 15 lbc pressure (121℃) on slow exhaust. Store at room temperature or 4℃ 



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