总大肠菌群酶底物法的操作步骤与结果判定及质量控制！
小杨 / 2026-03-18 10:29:33
百欧博伟生物：总大肠菌群酶底物法是基于特异性酶促反应的快速检测方法，核心是利用总大肠菌群产生的β‑半乳糖苷酶分解显色底物，通过颜色变化判定阳性，可同时区分
大肠埃希氏菌，是水质微生物检测的主流快速方法。
一、方法原理（核心）
总大肠菌群在36±1℃培养时，产生β‑半乳糖苷酶，将培养基中无色底物ONPG分解为黄色的邻硝基苯酚（ONP），培养基变黄即为总大肠菌群阳性。
若同时含
大肠埃希氏菌，其产生的β‑葡萄糖醛酸酶会分解MUG，在365nm 紫外灯下产生蓝色荧光，可同步区分。
粪大肠菌群检测：在44.5℃培养，同样以ONPG 显色判定阳性。
二、适用范围
适用：地表水、地下水、生活污水、工业废水、生活饮用水等。
检出限：10 MPN/L（最可能数/升）。
不适用：水样颜色过深（干扰判读）、含高浓度抑制剂。
三、主要试剂与仪器
1、试剂
MMO‑MUG 培养基（含 ONPG、MUG、抑菌剂、营养盐），市售成品为主。
中和剂：硫代硫酸钠（除余氯）、EDTA‑2Na（螯合重金属）。
2、仪器
恒温培养箱：36±1℃、44.5±0.5℃。
紫外灯：365nm（观察荧光）。
定量盘（51 孔/97 孔）、定量瓶、封口机、无菌吸管、高压灭菌器。
四、操作步骤（定量盘法，最常用）
1、样品处理
采集 100mL 水样，若含余氯，加0.1mL 10% 硫代硫酸钠中和。
浑浊水样可适当稀释，记录稀释倍数。
2、加样与试剂
将 100mL 水样倒入定量瓶，加入 1 管MMO‑MUG 试剂，摇匀至完全溶解。
3、分装与封口
混合液倒入定量盘（51 孔/97 孔），置于橡胶衬垫，用封口机密封。
4、培养
总大肠菌群：36±1℃培养24±2h。
粪大肠菌群：44.5±0.5℃培养24±2h。
5、结果判读
肉眼观察：变黄孔为总大肠菌群阳性。
6、计数与计算
统计阳性孔数，查MPN 表（51 孔/97 孔对应表），计算MPN/100mL。
五、结果判定与报告
定性：变黄 = 总大肠菌群阳性；不变色 = 阴性。
定量：按阳性孔数查 MPN 表，报告MPN/100mL，注明稀释倍数。
六、干扰与消除
余氯：加硫代硫酸钠中和。
重金属：加EDTA‑2Na螯合。
颜色干扰：水样稀释至颜色不影响判读；必要时用滤膜预处理。
杂菌：培养基含抑菌剂，抑制非大肠菌群生长。
七、质量控制（QA/QC）
空白对照：无菌水 + 试剂，培养后不变色、无荧光。
每批样品至少做 1 组质控。
八、方法优势
快速：24h 出结果，无需验证试验。
简便：操作 4 步，无需复杂分离纯化。
定量：定量盘 + MPN 表，结果准确可溯源。
九、相关标准
环保：HJ 1001—2018《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》。
生活饮用水：GB/T 5750.12—2023《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》。
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