小鼠肾小球内皮细胞的原代分离与培养及冻存与复苏要点！_技术提供

小杨 / 2026-03-10 09:32:07

小鼠肾小球内皮细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质。所以，体外培养的肾小球内皮细胞在免疫学和病理生理学领域中具有重要的研究价值。

小鼠肾小球内皮细胞（Mouse Glomerular Endothelial Cells, MGECs）的核心知识，包括生物学特性、分离培养、鉴定方法、功能与疾病研究价值及关键注意事项。

一、基本生物学特性

解剖定位：覆盖肾小球毛细血管腔面，是肾小球滤过屏障的第一道防线，与基底膜、足细胞共同构成滤过膜；细胞间有窗孔结构，利于水和小分子物质滤过，同时限制大分子与血细胞通过。

形态与生长：原代培养呈圆形/多角形，融合后为单层铺路石样贴壁细胞；细胞质丰富，核圆/卵圆形；体外增殖能力有限，一般 2–5 代活性良好，不宜过度传代。

特征标志物

阳性：CD31（PECAM-1）、CD105、vWF（von Willebrand 因子）、FLK-1；可摄取乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL），具有体外成管能力。

阴性：排除标志物如 α-SMA（系膜细胞）、podocin（足细胞）、CK18（肾小管上皮）。

核心功能：调节肾小球滤过率；合成前列环素、NO 等抗凝/抗血栓因子；参与炎症反应与免疫细胞黏附；维持毛细血管结构稳定。

二、原代分离与培养

分离步骤：无菌取小鼠肾皮质→过系列不锈钢筛网机械分离肾小球→胶原酶 Ⅳ 消化解离细胞→用内皮专用培养基（含 ECGS/EGF、肝素、血清）接种；可通过 CD31 免疫磁珠分选进一步纯化。

培养条件：37℃、5% CO₂、饱和湿度；基质推荐明胶/纤连蛋白包被培养瓶，提升贴壁率；避免长至 100% 汇合，70%–80% 密度传代；消化用 0.25% 胰酶 - EDTA，控制时间防损伤。

常见问题：杂细胞污染（系膜、上皮细胞）需磁珠分选/差速贴壁；细胞增殖慢可优化培养基生长因子浓度；早期易脱壁需保证包被质量与稳定环境。

三、鉴定方法

免疫荧光/免疫组化：CD31、vWF 阳性染色；ac-LDL 荧光标记摄取实验。

功能验证：Matrigel 基质上形成毛细血管样管状结构。

RT-PCR/ Western blot：检测内皮标志物表达，排除杂细胞基因。

四、研究应用与疾病关联

肾小球疾病模型：糖尿病肾病、狼疮性肾炎、缺血再灌注损伤中，内皮损伤（窗孔消失、屏障破坏、炎症因子释放）是核心病理环节；MGECs 是研究药物保护内皮、改善滤过功能的关键体外模型。

血管生成与修复：探讨肾小球微血管再生机制，筛选促血管修复分子。

炎症与血栓：研究内皮细胞黏附分子（ICAM-1、VCAM-1）在免疫细胞浸润中的作用。

五、冻存与复苏要点

冻存液：90% 胎牛血清 + 10% DMSO，程序降温至–80℃过夜，再转入液氮长期保存。

复苏：37℃水浴快速融化，低速离心去 DMSO，轻柔重悬后接种于包被好的培养瓶，添加预热培养基，静置 4–6 小时后更换培养基。

六、注意事项

原代 MGECs传代次数严格控制（一般≤3 代用于功能实验），避免表型漂移。

全程无菌操作，防止支原体污染；定期检测细胞形态与标志物表达。

不同品系小鼠的 MGECs 在增殖与功能上可能存在差异，实验需保持品系一致。

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