乳糖发酵培养基的实验原理与方法及注意事项与结果判断！
小杨 / 2026-02-06 09:40:11
一、实验原理
1、培养基成分与作用
乳糖：唯一或主要可发酵碳源。
蛋白胨：提供氮源、氨基酸、生长因子。
指示剂：常用酚红（phenol red），也有用溴甲酚紫等。
中性/碱性：红色/紫红色
酸性（pH < 6.8 左右）：黄色
倒置杜氏小管（Durham tube）：用于收集气体，判断是否产气。
缓冲盐：维持初始 pH，一般调至7.2–7.4左右。
2、生化反应原理
细菌若具有β- 半乳糖苷酶等相关酶系 → 可分解乳糖 → 产生乳酸、乙酸等有机酸。
产酸 → 培养基 pH 下降 → 指示剂由红→黄。
部分细菌在发酵产酸的同时，会产生气体（如 H₂、CO₂） → 杜氏小管内出现气泡/空泡。
不发酵乳糖的细菌：
利用蛋白胨等产碱或不明显产酸 → 颜色不变或偏红/紫红；
一般无气泡。
一句话总结：看颜色（产酸）+ 看气泡（产气），判断是否乳糖发酵型细菌。
二、实验方法（简要）
制备乳糖发酵管（含乳糖、蛋白胨、酚红、倒置杜氏小管），灭菌备用。
用接种环取待检菌纯培养物，接种于乳糖发酵管。
37℃ 培养 18–24 h，必要时可延长至 48 h。
观察：
培养基颜色变化；
杜氏小管内有无气泡。
三、实验结果判断
1、结果分级（常用）
产酸产气（⊕ / A+G）
现象：培养基变黄，杜氏小管内有明显气泡。
含义：该菌能发酵乳糖，产酸并产气。
典型菌：大肠埃希菌（E. coli）等大肠菌群。
产酸不产气（+ / A）
现象：培养基变黄，杜氏小管无气泡。
含义：能发酵乳糖产酸，但不产气。
典型菌：部分克雷伯菌、肠杆菌或某些乳酸菌等（视具体菌种而定）。
不产酸不产气（- /-）
现象：颜色仍为红色/紫红色，杜氏小管无气泡。
含义：不发酵乳糖。
有时会出现产碱/不变色但浑浊生长：说明细菌生长但不利用乳糖产酸，仍判为乳糖阴性。
2、结果记录示例（可直接写进报告）
四、注意事项（写报告常用）
必须设未接种空白管作对照，排除培养基本身变色或污染。
杜氏小管必须完全倒置、无气泡，否则会误判产气。
培养时间不宜过长，避免细菌后期分解蛋白胨产碱，导致“回变”（黄→红）。
颜色判断以整管均匀变黄为准，局部轻微变色一般不计。
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