玫瑰红钠琼脂培养基的核心原理和使用方法及质控要点！
小杨 / 2026-01-22 09:18:23
玫瑰红钠琼脂培养基是霉菌和酵母菌的选择性计数培养基，核心原理是利用玫瑰红钠抑制细菌与过快生长霉菌，结合酸性 pH 与营养组分促进真菌生长并便于计数；使用需遵循称量溶解、灭菌、接种培养与结果判读的标准化流程。以下是详细说明：
一、核心原理
1、营养供给
蛋白胨/胨提供氮源、氨基酸与碳源，满足真菌生长的基础营养需求。
葡萄糖提供快速可利用碳源，支撑霉菌与酵母菌的能量代谢。
磷酸二氢钾维持培养基 pH 稳定（典型 pH 6.0±0.2），硫酸镁提供微量元素，保障真菌酶系统活性。
3、选择性抑制
玫瑰红钠（0.0133 g/L）可抑制绝大多数细菌生长，并减缓霉菌菌落蔓延，让菌落边界清晰、易于计数。
酸性 pH 环境进一步抑制细菌，同时适配真菌偏好的酸性生长条件。
4、凝固与观察
琼脂作为凝固剂，使培养基呈固体状态，便于菌落形成与计数；玫瑰红钠还可作为指示剂，让菌落呈现特征性颜色（如酵母菌落呈粉红色），提升辨识度。
二、典型配方（每升）
成分 含量 作用
胨/蛋白胨 5.0 g 氮源、碳源、生长因子
葡萄糖 10.0 g 碳源、能源
磷酸二氢钾 1.0 g 缓冲剂，维持 pH 稳定
硫酸镁 0.5 g 提供镁离子，激活酶活性
玫瑰红钠 0.0133 g 抑菌、指示、限制菌落蔓延
琼脂 14.0–15.0 g 凝固剂，形成固体基质
纯化水 1000 mL 溶剂，维持体系渗透压
pH 6.0±0.2（25℃） 适配真菌生长，抑制细菌
三、标准使用方法（霉菌与酵母菌计数）
1、培养基制备
称取干粉培养基 30.5–31.5 g（按不同厂家配方调整），加入 1 L 纯化水/蒸馏水，搅拌均匀。
加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶或试管，121℃高压灭菌 15–20 分钟，冷却至 45℃左右备用。
2、样品处理与接种
样品梯度稀释：固体样品均质后用无菌生理盐水做 10 倍系列稀释，液体样品直接稀释，选择 3 个适宜稀释度（预计菌落数 20–200 CFU /皿）。
取 1.0 mL 稀释液加入无菌平皿，每个稀释度做 2–3 个平行皿。
倾注约 15 mL 冷却至 45℃的培养基，轻轻旋转混匀，待琼脂凝固后倒置培养。
3、培养与计数
培养条件：23–28℃培养 72 小时；菌落微小或计数困难时，可延长至 4–5 天。
计数规则：选取菌落数 20–200 CFU 的平板，计算平均菌落数；若平板上细菌菌落数显著多于营养琼脂平板，需同时计数细菌并单独报告。
结果计算：菌落数（CFU/g 或 CFU/mL）= 平均菌落数 × 稀释倍数。
四、质量控制要点
无菌性检查：灭菌后取部分培养基培养，确认无杂菌生长。
灵敏度测试
质控菌株 培养条件 预期结果
黑曲霉 CMCC (F) 98003 20–25℃，72 小时 白色菌丝，黑色孢子，生长良好
白色念珠菌 CMCC (F) 98001 20–25℃，48–72 小时 淡粉色菌落，回收率≥70%
酿酒酵母 ATCC 9763 20–25℃，48–72 小时 粉红色菌落，回收率≥70%
培养基外观：呈玫红色，表面平整、无裂痕、无气泡与杂质，pH 符合标准。
五、注意事项
加热溶解时避免剧烈沸腾，防止琼脂浓度不均；灭菌后及时冷却，避免凝固过快。
倾注培养基时温度控制在 45℃左右，防止烫伤样品中的真菌，同时避免杂菌污染。
霉菌培养过程中可能产生孢子，操作需在生物安全柜中进行，避免交叉污染。
不同样品类型需遵循对应标准的具体要求。
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