志贺氏菌生化与血清学鉴定方法的操作要点及注意事项！
小杨 / 2026-01-19 09:57:38
志贺氏菌的鉴定需结合生化鉴定和血清学鉴定两步，生化鉴定用于筛选出符合志贺氏菌表型特征的菌株，血清学鉴定则用于确定其血清群和血清型，二者结合才能完成准确的菌种确证。以下是具体的方法和操作要点：
一、生化鉴定方法
志贺氏菌属于肠杆菌科志贺氏菌属，为革兰氏阴性短小杆菌，无芽孢、无鞭毛，生化特征核心是不发酵乳糖、蔗糖，发酵葡萄糖产酸不产气。常用的生化鉴定分为常规生化试验和自动化生化鉴定两类。
1、常规生化试验（实验室经典方法）
挑取纯培养的疑似菌落，接种至相应生化培养基，36±1℃培养 18~24h，观察结果。关键试验及判定标准如下：
生化试验 培养基/试剂 志贺氏菌典型结果 备注
革兰氏染色 结晶紫、碘液、番红 革兰氏阴性短小杆菌，无芽孢、无鞭毛 宋内氏志贺氏菌偶见鞭毛
葡萄糖发酵试验 葡萄糖发酵管（含溴甲酚紫指示剂） 产酸不产气 福氏志贺氏菌个别菌株可产气
乳糖发酵试验 乳糖发酵管 阴性（不发酵） 宋内氏志贺氏菌可能出现延迟发酵（需延长培养至 48h）
蔗糖发酵试验 蔗糖发酵管 阴性（不发酵） 与乳糖发酵结果一致，辅助排除其他肠道菌
赖氨酸脱羧酶试验 赖氨酸脱羧酶培养基 阴性 核心鉴别试验，可区分志贺氏菌与沙门氏菌（沙门氏菌阳性）
硫化氢试验 三糖铁琼脂（TSI）/醋酸铅纸条 阴性 TSI 斜面和底层均产酸（斜面红→黄，底层黄），无黑色沉淀
靛基质试验 蛋白胨水 + 靛基质试剂 因菌株而异（福氏多阴性，痢疾多阳性） 非核心判定指标，仅作辅助
动力试验 半固体培养基 阴性（无动力） 志贺氏菌无鞭毛，穿刺接种后无扩散生长
关键鉴别组合：葡萄糖产酸不产气 + 乳糖/蔗糖阴性 + 赖氨酸脱羧酶阴性 + 动力阴性 → 符合志贺氏菌生化特征。
2、自动化生化鉴定（适用于批量检测）
采用全自动微生物鉴定系统，操作步骤如下：
挑取纯培养菌落，制备标准化菌悬液（浓度符合仪器要求，如 0.5~0.6 麦氏浊度）；
将菌悬液接种至肠杆菌科鉴定卡/板；
放入仪器，设定培养条件（36±1℃，18~24h），仪器自动检测碳源利用、酶活性等生化反应；
系统通过数据库比对，输出鉴定结果及置信度（一般要求置信度≥90%）。
二、血清学鉴定方法
血清学鉴定是
志贺氏菌分型的核心方法，依据菌体抗原（O 抗原）的差异，将志贺氏菌分为 4 个血清群：
常用方法为玻片凝集试验，操作步骤及要点如下：
试剂准备：志贺氏菌分型诊断血清（群特异性血清、型特异性血清）、生理盐水、洁净载玻片。
菌悬液制备：挑取营养琼脂上的纯培养菌落，用生理盐水制成均匀的菌悬液（浓度约 1.0 麦氏浊度）。
凝集反应操作
取洁净载玻片，划分 2 个区域，分别标记“试验区”和“阴性对照区”；
试验区滴加 1 滴群特异性血清，阴性对照区滴加 1 滴生理盐水；
两区各加入 1 环菌悬液，用接种环充分混匀，轻轻晃动载玻片；
室温下观察 1~2min，出现肉眼可见的颗粒状凝集即为阳性。
分型流程
先使用4 种群特异性血清进行凝集，确定菌株所属血清群；
再用该群对应的型特异性血清进行凝集，确定具体血清型。
三、鉴定注意事项
纯培养是前提：必须从选择性培养基挑取疑似菌落，在营养琼脂上纯化 1 代后再进行鉴定，避免杂菌干扰。
血清凝集的干扰处理
若出现“自凝”（菌悬液加生理盐水也凝集），需用生理盐水反复洗涤菌体后再试验；
若凝集反应微弱，可将载玻片轻微加温（37℃左右），增强抗原抗体结合。
特殊菌株的处理：宋内氏志贺氏菌存在光滑型（S）和粗糙型（R）变异，粗糙型菌株可能不与血清凝集，需结合生化特征综合判定。
生物安全要求：志贺氏菌为致病菌，所有操作需在 BSL-2 实验室进行，实验废弃物需高压灭菌后处理。
欢迎访问
微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！
下载附件
上一篇：淡紫色拟青霉的应用领域及其在有机农业中的应用前景！
下一篇：大鼠胸大动脉平滑肌细胞的分离培养方法及质量控制要点！