沙门氏菌血清学鉴定的前期准备与操作过程及结果判断！
小杨 / 2025-12-26 09:36:41
沙门氏菌血清学鉴定的核心操作是玻片凝集法，部分可疑菌株需结合试管凝集法复核，操作过程围绕 O 抗原定型→Vi 抗原验证（必要时）→H 抗原定型 的顺序展开，具体步骤如下：
一、前期准备
1、菌株纯化
将待检菌株接种于营养琼脂或血琼脂平板，37℃培养 18~24h，挑取单个光滑型菌落进行纯培养，确保无杂菌污染。
老化菌落抗原活性会下降，优先选择新鲜培养物。
2、试剂与器材准备
试剂：
沙门氏菌成套诊断血清（O 多价、O 单价、H 多价、H 单相、Vi 抗原血清）、无菌生理盐水。
器材：洁净载玻片、接种环、酒精灯、记号笔、恒温箱（或水浴锅，用于 Vi 抗原破坏）。
3、Vi 抗原预处理（预判性操作）
若待检菌株疑似
伤寒沙门氏菌、
丙型副伤寒沙门氏菌，挑取菌落混悬于生理盐水，100℃水浴加热 30min，破坏可能覆盖 O 抗原的 Vi 抗原；或先做 Vi 抗原定型，阳性菌株再加热处理。
二、核心操作：玻片凝集法
（一）O 抗原定型（分群依据）
玻片分区：取洁净载玻片，用记号笔划分 2 个区域（约 2cm×2cm），标记“试验孔”和“阴性对照孔”。
加样：试验孔滴加 1 滴O 多价诊断血清，阴性对照孔滴加 1 滴无菌生理盐水。
菌液混悬：用灭菌接种环挑取待检菌菌落，分别在试验孔和对照孔中轻轻研磨，使菌液与血清/生理盐水充分混匀，形成均匀菌悬液。
反应与观察：轻轻晃动玻片（频率约 1 次/秒），在室温（20~25℃）下观察 1~2min。
阳性结果：试验孔出现肉眼可见的颗粒状凝集，液体变澄清；对照孔无凝集，菌悬液呈均匀浑浊。
阴性结果：试验孔与对照孔均无凝集，需重新试验或确认是否为 Vi 抗原阻断。
单价血清定型：O 多价血清凝集阳性的菌株，再用O 单价诊断血清逐一检测，确定具体 O 抗原群。
（二）Vi 抗原定型（针对 O 抗原阴性菌株）
玻片分区标记“Vi 试验孔”和“生理盐水对照孔”。
试验孔滴加 1 滴Vi 抗原诊断血清，对照孔滴加生理盐水，混悬菌落后观察 1~2min。
若试验孔出现凝集，判定为Vi 抗原阳性；此时需将菌株加热处理后，重新进行 O 抗原定型。
（三）H 抗原定型（分型依据）
H 抗原分第 1 相（特异相） 和第 2 相（非特异相），双相菌需诱导相转变，操作如下：
相诱导处理：将待检菌接种于半固体培养基，37℃培养 24h，取培养基边缘的菌落（易表达第 2 相 H 抗原）进行检测；中心菌落多表达第 1 相 H 抗原。
多价血清筛选：玻片分区，试验孔加 1 滴H 多价诊断血清，对照孔加生理盐水，混悬菌落后观察凝集反应。
单相血清定型
多价血清阳性的菌株，先使用第 1 相 H 单价血清检测，确定特异相抗原。
再使用第 2 相 H 单价血清检测，确定非特异相抗原。
结果判定
仅与某一相血清凝集 → 单相菌。
与两相血清均凝集 → 双相菌。
三、结果复核：试管凝集法（针对不典型菌株）
若玻片凝集结果微弱或可疑，采用试管凝集法定量验证，步骤如下：
稀释血清：将诊断血清用生理盐水做倍比稀释，分装于试管中。
加菌液：每管加入等量标准浓度菌悬液，混匀后 37℃水浴过夜。
观察结果：以出现明显凝集的最高血清稀释度为该菌株的凝集效价，效价≥1:80 判定为阳性。
四、最终血清型确定
根据 O 抗原群 + H 抗原相型 的组合，对照《沙门氏菌血清分型表》，确定菌株的具体血清型（如
伤寒沙门氏菌：O9，Hd；
猪霍乱沙门氏菌：O6,7，Hc:1,5）。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在
微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！
下载附件
上一篇：需氧革兰阳性杆菌鉴定的生化反应与方法及操作流程！
下一篇：四号琼脂培养基的标准使用流程及关键注意事项与质控！