志贺氏菌显色培养基的显色原理与使用方法及操作流程！
小杨 / 2025-10-17 09:16:53
志贺氏菌显色培养基是通过特异性酶解反应显色来鉴别志贺氏菌，使用时需严格遵循无菌操作和培养流程。
一、显色原理
添加特异性底物：培养基中加入了志贺氏菌专属的酶底物（如特定 β- 葡萄糖苷酶底物），该底物与显色基团（如硝基酚类）结合，本身不显色。
酶解反应显色：
志贺氏菌能产生特定酶，可分解培养基中的对应底物，释放出显色基团，使菌落呈现特定颜色（多为红色、紫色或玫瑰色）。
抑制杂菌干扰：培养基中还添加了抑菌剂（如煌绿、胆盐），能抑制
大肠杆菌、
沙门氏菌等常见肠道杂菌生长，或让杂菌呈现与志贺氏菌不同的颜色（如
大肠杆菌呈蓝色、无色），减少误判。
二、使用方法（通用流程）
使用需遵循“准备 - 接种 - 培养 - 观察”四步，关键在于无菌操作和控制培养条件：
1、培养基准备
取干粉培养基，按说明书比例（如 1 升水加 35 克干粉）加入蒸馏水或纯化水，搅拌至完全溶解。
分装到锥形瓶或培养皿中，121℃高压蒸汽灭菌 15-20 分钟，灭菌后冷却至 45-50℃（手摸瓶壁不烫），避免温度过高破坏显色物质。
2、样品接种
无菌操作下，取待检样品（如粪便悬液、食品匀浆）0.1-0.2 毫升，滴加在冷却后的培养基表面。
用无菌涂布棒将样品均匀涂满培养基表面，避免涂液堆积（防止菌落融合）。
3、培养条件
将接种好的培养皿倒置（防止冷凝水滴落污染菌落），放入 36±1℃的恒温培养箱，需厌氧或微氧环境（部分培养基需添加厌氧产气包），培养 18-24 小时。
4、结果观察与确认
初步判断：观察菌落颜色，挑取符合志贺氏菌特征的菌落（如红色、直径 1-2 毫米、边缘整齐的菌落）。
进一步确认：显色仅为初步筛选，需将可疑菌落接种到生化鉴定管或用 PCR、血清学试验验证，避免假阳性。
三、注意事项
抑菌剂对志贺氏菌也有轻微抑制，需严格控制培养时间，不足 18 小时可能不显色，超过 24 小时菌落易老化变形。
样品接种后需尽快培养，避免培养基干燥；若培养基灭菌后出现沉淀或变色，不可使用。
操作全程需无菌，防止环境杂菌污染，影响结果准确性。
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