屎肠球菌选择性培养基的核心原理与常用类型及注意事项！
小杨 / 2025-10-13 10:01:55
屎肠球菌（Enterococcus faecium）是肠球菌属的重要成员，广泛存在于肠道及自然环境中，部分菌株因耐药性成为临床重要条件致病菌。其选择性培养依赖“营养供给 + 抑制杂菌 + 菌株鉴别”的三重设计，核心是利用肠球菌的生理特性排除其他微生物干扰，同时通过生化反应区分屎肠球菌与其他肠球菌（如
粪肠球菌）。
一、屎肠球菌选择性培养基的核心原理
屎肠球菌的选择性培养基于其独特的生物学特性，培养基通过以下 3 个关键设计实现选择性：
1、营养基础：满足肠球菌生长需求
肠球菌为兼性厌氧革兰氏阳性球菌，营养需求中等，培养基需提供基础碳源、氮源和生长因子：
碳源：葡萄糖、乳糖等（部分培养基含蔗糖，利用肠球菌的发酵特性鉴别）；
氮源：胰蛋白胨、大豆蛋白胨等，提供氨基酸和多肽；
生长因子：酵母提取物补充 B 族维生素，促进肠球菌快速繁殖。
2、抑制成分：排除杂菌干扰
肠道及环境样本中含大量革兰氏阴性菌（如
大肠埃希菌）、真菌及其他革兰氏阳性菌（如
葡萄球菌），需通过以下成分抑制：
抑制成分 作用机制 抑制对象
胆盐/去氧胆酸钠 破坏革兰氏阴性菌的细胞膜（革兰氏阳性菌因细胞壁厚、脂质少，耐受度更高） 绝大多数革兰氏阴性菌（如大肠埃希菌、变形杆菌）
叠氮钠（NaN₃） 抑制细胞色素氧化酶，阻断有氧呼吸（肠球菌可通过发酵供能，耐受低浓度叠氮钠） 需氧革兰氏阳性菌（如葡萄球菌、链球菌）、真菌
万古霉素（可选） 抑制细菌细胞壁合成（仅用于筛选耐万古霉素屎肠球菌 VRE，敏感菌被抑制） 万古霉素敏感菌（如粪肠球菌、葡萄球菌）
亚碲酸钾（可选） 抑制杂菌，肠球菌可还原亚碲酸钾为黑色单质碲，辅助鉴别 大部分革兰氏阴性菌及部分阳性菌
3、鉴别成分：区分屎肠球菌与其他肠球菌
肠球菌属内（如
屎肠球菌、
粪肠球菌）的鉴别依赖生化反应差异，核心是利用屎肠球菌的特定酶活性或发酵特性：
β- 葡萄糖苷酶：
屎肠球菌可产生 β- 葡萄糖苷酶，水解培养基中的七叶苷生成葡萄糖和七叶素；七叶素再与培养基中的柠檬酸铁铵反应，生成黑色的铁 - 七叶素复合物，使菌落周围出现黑色晕圈（肠球菌属通用鉴别特征，可排除非肠球菌）。
甘露醇/山梨醇发酵：
部分选择性培养基含甘露醇：屎肠球菌可发酵甘露醇产酸，使培养基 pH 降低，指示剂由红变黄；而粪肠球菌不发酵甘露醇，菌落周围仍为红色，实现种间区分。
色素或特殊指示剂：
部分商用培养基含 chromogenic 底物，屎肠球菌可分解底物释放特定颜色（如紫色），直接通过菌落颜色鉴别，无需额外生化试验。
二、常用屎肠球菌选择性培养基类型
不同培养基的设计侧重不同（如常规分离 vs VRE 筛选），需根据实验目的选择：
培养基名称 核心成分 用途 屎肠球菌菌落特征
叠氮钠 - 七叶苷琼脂 叠氮钠、七叶苷、柠檬酸铁铵 常规肠球菌分离与鉴别 灰白色菌落，周围有黑色晕圈
甘露醇 - 叠氮钠琼脂 叠氮钠、甘露醇、酚红 区分屎肠球菌与粪肠球菌 黄色菌落（发酵甘露醇），周围培养基变黄
ChromID VRE 琼脂 万古霉素、chromogenic 底物 筛选耐万古霉素屎肠球菌（VRE） 紫色菌落（分解底物）
胆汁 - 七叶苷 - 叠氮钠琼脂 胆盐、七叶苷、叠氮钠 强选择性分离肠道中的肠球菌 黑色菌落（七叶素 - 铁复合物）
三、屎肠球菌选择性培养基的使用方法
以常规样本（如粪便、食品）分离屎肠球菌为例，标准操作流程如下：
1、实验前准备
培养基制备：
商用干粉培养基按说明书溶解（如 1000mL 蒸馏水 + 40g 干粉），加热煮沸至完全溶解，分装后 121℃高压灭菌 15 分钟；若含万古霉素等热敏成分，需待培养基冷却至 50-55℃时无菌加入，摇匀后倒平板（厚度约 3-4mm），室温凝固后 4℃避光保存（有效期≤1 周）。
样本预处理（可选，针对含菌量高的样本）：
粪便样本需用无菌生理盐水梯度稀释（如 10⁻¹~10⁻⁶），取 0.1~0.2mL 稀释液接种，避免杂菌过度生长掩盖目标菌落；食品样本需均质化后按同样方法稀释。
2、接种与培养
接种方式：
划线接种：用无菌接种环取预处理后的样本，在培养基表面进行三区划线（逐步稀释菌量，获得单菌落）；
涂布接种：取 0.1mL 稀释液滴于平板中央，用无菌 L 型玻棒均匀涂布，室温放置 5-10 分钟待液体吸收。
培养条件：
肠球菌为兼性厌氧，可选择：
需氧培养：35-37℃恒温培养箱，培养 24-48 小时；
厌氧培养（推荐，减少需氧杂菌干扰）：35-37℃厌氧环境（如厌氧袋、厌氧培养箱），培养 24 小时（生长速度更快）。
3、菌落观察与初步鉴别
培养后根据培养基特性判断目标菌落，以叠氮钠 - 七叶苷琼脂为例：
阳性特征：菌落呈灰白色、圆形、边缘整齐（直径 0.5-1mm），菌落周围或下方出现黑色晕圈（七叶素 - 铁复合物）；
排除杂菌：若出现红色、黄色或无黑色晕圈的菌落，多为杂菌（如
葡萄球菌、
大肠埃希菌），可直接排除。
若使用甘露醇 - 叠氮钠琼脂，需额外观察：屎肠球菌菌落周围培养基呈黄色（发酵甘露醇产酸），而粪肠球菌菌落周围仍为红色，可直接区分两种肠球菌。
4、确认鉴定（关键步骤）
选择性培养仅为初步筛选，需通过以下方法确认是否为屎肠球菌：
革兰氏染色：取疑似菌落涂片，革兰氏染色后镜检，应为革兰氏阳性球菌，呈链状或成双排列（排除革兰氏阴性菌或葡萄球菌）；
生化试验：
触酶试验：阴性（区别于葡萄球菌，后者触酶阳性）；
6.5% 氯化钠耐受试验：阳性（肠球菌特性，接种于含 6.5% NaCl 的肉汤，37℃培养 24 小时，肉汤浑浊为阳性）；
分子鉴定（金标准）：提取菌落 DNA，通过 PCR 扩增 16S rRNA 基因或屎肠球菌特异性基因，测序后与数据库比对，确认物种。
四、注意事项
1、安全操作：
叠氮钠为剧毒物质（抑制细胞呼吸），操作时需戴手套、口罩，避免接触皮肤或吸入；若不慎洒落，需用次氯酸钠溶液处理后清理；培养基废弃前需 121℃高压灭菌 30 分钟，避免环境污染。
2、培养时间控制：
若培养时间不足 24 小时，可能未形成明显黑色晕圈或黄色区域；超过 48 小时可能导致杂菌过度生长（如真菌），需及时观察。
3、VRE 筛选的特殊性：
筛选耐万古霉素屎肠球菌时，需使用含万古霉素（浓度通常为 6μg/mL）的培养基，且培养时间需延长至 48 小时，避免漏检缓慢生长的 VRE 菌株。
4、样本代表性：
粪便等样本中肠球菌含量差异大，建议同时接种 2-3 个不同稀释度的样本，提高分离成功率。
综上，
屎肠球菌选择性培养基的核心是“利用生理特性实现选择 + 生化反应实现鉴别”，使用时需结合样本类型选择合适培养基，并通过生化或分子方法确认鉴定，确保结果准确。
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