志贺菌属微生物学检查的核心依据与关键步骤及操作流程！
小杨 / 2025-09-23 09:34:54
志贺菌属的微生物学检查核心是分离培养与鉴定，结合血清学试验和分子生物学方法，最终实现精准检测，为细菌性痢疾的诊断和治疗提供依据。
该检查流程通常分为标本采集、直接检查、分离培养、鉴定试验、毒力检测及分子生物学检测六个关键步骤，各环节均有严格要求以确保结果准确。
一、标本采集
标本质量直接影响检测结果，需严格遵循“早期、新鲜、正确部位”原则。
采集时间：发病早期（最好在服用抗生素前），此时粪便中细菌数量最多，检出率最高。
采集部位：优先选取黏液脓血便，避免采集成形粪便（含菌量极少）。若患者无粪便，可通过直肠拭子采集。
标本处理：采集后需立即送检，若无法及时送检（超过 2 小时），需将标本放入运送培养基中保存，防止细菌死亡。
二、直接检查
该步骤为初步筛查，快速判断是否存在可疑菌，但不能确诊。
生理盐水涂片镜检：取少量黏液脓血便涂片，革兰染色后镜检。志贺菌属为革兰阴性短小杆菌，无芽孢、无荚膜，多数无鞭毛（与沙门菌的重要区别）。镜检若发现大量此类细菌，结合临床症状，可初步怀疑。
抗原检测：采用免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法，直接检测标本中的志贺菌抗原。优点是快速（1-2 小时出结果），适合早期诊断或大规模流行病学筛查，但特异性略低于培养法，可能出现假阳性。
三、分离培养
分离培养是确诊志贺菌感染的金标准之一，可获得纯菌株用于后续鉴定。
培养基选择：
先接种于肠道选择培养基，如 SS 琼脂（沙门菌 - 志贺菌琼脂）、麦康凯琼脂或中国蓝琼脂，抑制杂菌生长，选择性培养肠道致病菌。
志贺菌在 SS 琼脂上生长后，形成无色、半透明、光滑、较小的菌落（直径 1-2mm），因不发酵乳糖，故菌落周围无红色环（乳糖发酵菌如大肠杆菌会形成红色菌落）。
培养条件：37℃需氧培养 18-24 小时，若培养 48 小时仍无菌落生长，可报告“未检出志贺菌属”。
纯培养：挑取可疑菌落，接种于营养琼脂或双糖铁培养基（TSI） ，获得纯菌株并进行初步生化反应判断。
四、鉴定试验
通过生化反应和血清学试验，明确是否为志贺菌属及具体血清型。
（1）生化反应鉴定
志贺菌属的生化反应具有典型特征，可与其他肠道杆菌区分，常用双糖铁培养基和生化反应管检测：
（2）血清学鉴定
群血清凝集试验：先用四种群特异性抗血清（抗 A、抗 B、抗 C、抗 D）与纯菌株进行玻片凝集试验，确定菌株所属群。
若与抗 A 血清凝集，为痢疾志贺菌（A 群）；
与抗 B 血清凝集，为福氏志贺菌（B 群）（我国最常见的血清群）；
与抗 C 血清凝集，为鲍氏志贺菌（C 群）；
与抗 D 血清凝集，为宋内志贺菌（D 群）。
型血清凝集试验：确定群后，再用该群的分型血清（如福氏志贺菌分为 1-6 型）进一步鉴定至具体血清型，用于流行病学调查和溯源。
五、毒力检测
志贺菌的致病性主要依赖其毒力因子（如侵袭力、内毒素、外毒素），毒力检测可辅助判断菌株的致病能力。
侵袭力检测：常用HeLa 细胞或 Vero 细胞侵袭试验，观察细菌是否能侵入细胞内生长繁殖。志贺菌具有侵袭肠黏膜上皮细胞的能力，试验阳性提示菌株有致病性。
毒素检测：
内毒素：可通过鲎试验检测，但所有革兰阴性菌均有内毒素，特异性较低；
外毒素（志贺毒素）：仅痢疾志贺菌 1 型和部分 2 型产生，可通过 ELISA 检测，阳性提示菌株毒力更强，易引起严重症状。
六、分子生物学检测
现代实验室常用分子生物学方法，快速、敏感地检测志贺菌，尤其适合抗生素治疗后细菌培养阴性的情况。
聚合酶链反应（PCR）：检测志贺菌属特有的基因（如侵袭质粒抗原基因 ipaH），特异性和敏感性均高于传统培养法，可在数小时内出结果，还能区分不同血清群。
实时荧光定量 PCR（qPCR）：不仅能定性检测，还能定量分析标本中志贺菌的数量，用于评估感染严重程度和治疗效果。
基因测序：通过全基因组测序，分析菌株的基因结构、进化关系和耐药基因，为流行病学调查和精准用药提供依据。
七、耐药性检测
志贺菌对常用抗生素（如磺胺类、四环素类、氟喹诺酮类）的耐药率逐年上升，耐药性检测至关重要。
纸片扩散法（K-B 法）：将含有不同抗生素的纸片贴在接种了志贺菌的培养基上，培养后测量抑菌圈直径，判断菌株对该抗生素的敏感性。
肉汤稀释法：测定最低抑菌浓度（MIC），更精准地判断耐药程度，是耐药性检测的金标准。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！