李氏菌增菌肉汤基础培养基的原理与使用方法及注意事项！
小杨 / 2025-09-12 09:09:06
李氏菌增菌肉汤基础培养基是微生物检测中用于选择性增菌培养李斯特菌属（Listeria） 的常用培养基，尤其适用于食品、环境样本等复杂基质中低含量李斯特菌的富集，为后续分离、鉴定奠定基础。以下从原理、使用方法、注意事项三方面详细说明：
一、培养基原理
李斯特菌属（如
单核细胞增生李斯特菌，致病性最强）在自然环境中分布广泛，但在样本中常因含量低、受杂菌（如
大肠菌群、
葡萄球菌）抑制而难以直接分离。该培养基通过营养供给 + 选择性抑制的双重设计，实现李斯特菌的高效增殖，核心原理如下：
1、营养成分：满足李斯特菌生长需求
基础培养基的核心成分以“提供全面营养”为目标，确保李斯特菌在增菌过程中快速繁殖，常见成分及作用如下：
主要成分 作用
胰酪蛋白胨 提供优质蛋白质水解产物（氨基酸、多肽），作为碳源、氮源和能量来源
酵母浸粉 补充 B 族维生素、生长因子，促进李斯特菌（需特殊生长因子）的生长
葡萄糖 提供速效碳源，满足李斯特菌的基础能量需求
磷酸二氢钾/钠 维持培养基 pH 稳定（通常为 7.0±0.2），避免 pH 波动影响细菌生长
氯化钠 调节渗透压，模拟李斯特菌自然生长环境（如土壤、食品基质）
2、选择性成分：抑制杂菌，保留李斯特菌
需注意：
李氏菌增菌肉汤基础培养基本身不含选择性抑制剂，需在使用前添加特定“选择性添加剂”，才能实现“抑制杂菌、富集目标菌”的效果，具体机制如下：
萘啶酮酸（Nalidixic Acid）：属于喹诺酮类抗菌剂，通过抑制细菌 DNA 旋转酶，阻断 DNA 复制，对革兰氏阴性菌（如
大肠埃希菌、
沙门氏菌） 有强效抑制作用，但对革兰氏阳性的李斯特菌影响极小。
吖啶黄（Acridine Yellow）：属于碱性染料，通过干扰细菌核酸合成，对部分革兰氏阳性杂菌（如
葡萄球菌、
链球菌） 有抑制作用，同时不影响李斯特菌生长。
通过添加上述两种添加剂，培养基可有效排除样本中 90% 以上的杂菌，使
李斯特菌在竞争中占据优势，实现数量级的增殖（通常增菌 18-24 小时后，李斯特菌浓度可提升 10³-10⁵倍）。
二、使用方法
1、试剂与器材准备
基础培养基：李氏菌增菌肉汤基础干粉（按说明书规格，如 22.0g/1000mL）；
选择性添加剂：萘啶酮酸溶液（通常 10mg/mL，过滤除菌）、吖啶黄溶液（通常 10mg/mL，过滤除菌）；
器材：锥形瓶、移液管、高压灭菌锅、无菌操作台、培养箱（30-37℃）、pH 计（或 pH 试纸）。
2、培养基制备步骤
溶解干粉：按培养基说明书比例，称取定量基础干粉，加入 1000mL 纯化水（或蒸馏水），置于锥形瓶中，搅拌至完全溶解（可轻微加热助溶，避免煮沸）。
调节 pH：用 pH 计检测溶液 pH，若偏离 7.0±0.2，用 1mol/L HCl 或 NaOH 缓慢调节至目标范围。
分装灭菌：将调节好的培养基分装至锥形瓶（每瓶 100mL 或 200mL，根据样本量确定），加塞后用牛皮纸包裹瓶口，置于高压灭菌锅，121℃、103.4kPa（1.05kg/cm²）灭菌 15 分钟。
添加选择性添加剂：灭菌后取出培养基，置于无菌操作台内冷却至 45-50℃（手触锥形瓶外壁不烫手），按比例加入无菌的萘啶酮酸溶液和吖啶黄溶液（通常每 100mL 培养基各加 0.5mL，最终浓度均为 50μg/mL，具体按添加剂说明书调整），轻轻摇匀，避免产生气泡。
3、样本接种与增菌培养
样本处理：根据样本类型（如食品、环境拭子）按标准方法处理（如食品样本需均质、稀释，拭子样本需用无菌生理盐水洗脱），制备成 1:10 的样本匀液。
接种：在无菌操作下，取 10mL 样本匀液（或处理后的样本），接种至 100mL 已添加选择性添加剂的李氏菌增菌肉汤中，轻轻混匀。
培养：将接种后的培养基置于30-37℃恒温培养箱，静置培养18-24 小时（若样本中李斯特菌含量极低，可延长至 48 小时，但需注意避免杂菌过度生长）。
后续操作：增菌完成后，取适量菌液划线接种至李斯特菌选择性分离培养基，进行后续分离、鉴定（如生化试验、血清学试验）。
三、关键注意事项
选择性添加剂的时效性：萘啶酮酸和吖啶黄溶液需现配现用，或分装后避光冷藏（4℃）保存，且保存时间不超过 1 周；添加时需确保培养基温度降至 45-50℃，避免高温破坏添加剂活性。
灭菌控制：基础培养基需严格按 121℃、15 分钟灭菌，避免灭菌不彻底导致杂菌污染，或灭菌过度破坏营养成分。
培养温度控制：李斯特菌为兼性厌氧菌，最适生长温度为 30-37℃，需严格控制培养箱温度，避免温度过高（>37℃）抑制李斯特菌生长，或过低（<30℃）延长培养时间。
样本污染处理：若增菌后培养基出现异常浑浊、异味或颜色变化，可能是样本杂菌过多或操作污染，需重新处理样本并重复增菌步骤。
通过上述原理设计和标准化操作，
李氏菌增菌肉汤基础培养基可高效富集李斯特菌，为后续检测提供高浓度的目标菌液，是食品微生物安全检测（如 GB 4789.30《食品安全国家标准 食品微生物学检验 李斯特菌属检验》）中的核心培养基之一。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在
微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！
下载附件
上一篇：细菌芽孢染色法的准备工作与核心步骤及操作流程与注意事项！
下一篇：大肠杆菌生长曲线的测定之实验原理与操作步骤及数据处理！