沙堡弱液体培养基的检验原理和使用方法及主要应用！
小杨 / 2025-07-10 09:14:57
沙堡弱液体培养基（Sabouraud Liquid Medium）是专门用于分离和培养真菌（霉菌和酵母菌） 的一种经典液体培养基。其名称“弱”指的是其偏酸性的pH值，这是其抑制细菌生长的关键。以下是其检验原理和使用方法：
一、检验原理
1、选择性原理：
低pH值 (约 pH 5.6)：这是沙堡弱培养基的核心选择性原理。大多数细菌在偏酸性的环境中生长受到显著抑制甚至无法生长，而大多数致病性真菌和腐生真菌在此pH范围内能够良好生长。
添加抗生素：通常在灭菌后的培养基中加入广谱抗生素。氯霉素主要抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，庆大霉素对革兰氏阴性菌效果更强。这进一步提高了培养基对细菌的抑制作用，同时不影响真菌的生长。
2、营养原理：
高糖浓度：培养基含有较高浓度的葡萄糖（通常4%）。这为真菌（尤其是酵母菌和需要丰富碳源的霉菌）提供了充足的能量来源，促进其快速生长和繁殖。
蛋白胨：提供真菌生长所需的氮源、维生素、氨基酸和矿物质等基本营养成分。
水：作为溶剂和反应介质。
3、总结原理：
沙堡弱液体培养基通过低pH环境和添加抗生素选择性抑制细菌生长，同时提供丰富的碳源（葡萄糖）和氮源（蛋白胨） 以支持真菌的旺盛生长。液体状态使得它特别适合用于需要振荡培养、大规模培养、观察浑浊度变化或从液体样本中富集真菌的情况。
二、使用方法
1、培养基配制与灭菌：
按照商品化脱水培养基包装上的说明称取所需量，或根据配方（通常为：葡萄糖40g，蛋白胨10g，蒸馏水1000ml）准确称量各组分。
将称量好的成分溶解于适量蒸馏水或去离子水中。
加热并不断搅拌使其完全溶解。
调节pH值至约5.6（通常配方设计溶解后即接近此pH，但需用pH计校准，可用稀盐酸或氢氧化钠微调）。
分装到合适的容器中（如试管、三角瓶）。
高压蒸汽灭菌：121°C, 15分钟。注意：抗生素不耐热！
2、添加抗生素 (无菌操作)：
待灭菌后的培养基冷却至约45-50°C（手摸容器温热但不烫手）。
在无菌环境（如超净工作台）中，按说明加入过滤除菌的抗生素溶液（常用氯霉素终浓度0.05-0.1mg/ml 或庆大霉素终浓度约5-50μg/ml）。轻轻摇匀。这是关键步骤，避免污染。
3、接种样本：
样本类型：无菌体液（血液、脑脊液、胸腹水、关节液）、经处理的组织匀浆液、环境水样、或从固体培养基上挑取的真菌菌落悬浮液等。
严格无菌操作！
将适量样本（如血液培养通常5-10ml）无菌注入装有适量培养基（通常血液培养瓶含50-100ml培养基）的培养瓶中。
对于其他液体样本或菌落悬液，直接无菌加入适量体积到装有培养基的试管或三角瓶中。
4、培养：
温度：大多数临床致病真菌在25-30°C培养。对于怀疑双相真菌或某些酵母菌（如
白念珠菌在37°C生长更好），需要同时或后续在37°C培养。培养温度需根据目标真菌设定。
条件：
静止培养：可放置于培养箱中静置。适合观察表面生长（如某些霉菌形成菌膜）或酵母菌的均匀浑浊。
振荡培养：更常用。将培养瓶/管置于摇床上进行振荡培养（如100-150 rpm）。这能增加溶氧，促进需氧真菌（特别是霉菌）的生长，使生长更均匀快速，便于观察浑浊度变化。
时间：真菌生长通常比细菌慢。至少培养1-2周，对于某些生长缓慢的深部真菌或从无菌部位采集的样本，建议培养4周或更久。需定期观察。
5、观察与结果判读：
肉眼观察：
浑浊度：酵母菌生长通常导致培养基均匀浑浊（类似细菌生长，但速度较慢）。霉菌生长可能表现为不均匀的絮状、颗粒状浑浊，或形成菌球、菌膜。
沉淀：菌体可能沉于管/瓶底形成沉淀。
表面生长：静止培养时，霉菌可能在液面形成菌膜。
显微镜检查：
一旦发现浑浊或疑似生长，取少量培养物进行革兰染色、墨汁染色（怀疑隐球菌）或乳酸酚棉蓝染色，直接在显微镜下观察真菌形态（酵母细胞、假菌丝、菌丝、孢子等），进行初步鉴定。
转种固体培养基：
一旦发现生长或到达培养终点（即使无肉眼可见生长），应将培养液转种到固体沙堡弱琼脂培养基或其他合适的真菌分离培养基（如
马铃薯葡萄糖琼脂）上，以便分离纯化菌落，进行更准确的形态学鉴定和后续的生化或分子生物学鉴定。
对于血液培养瓶，现代自动化系统通常会报警提示生长。
6、质量控制：
三、主要应用
从无菌体液（尤其是血液）中分离和富集真菌病原体（如念珠菌、隐球菌、马尔尼菲篮状菌）。
从其他液体样本（如脑脊液、关节液、胸腹水、尿液离心沉淀物悬浮液）中培养真菌。
大规模培养真菌以获取菌体或代谢产物。
研究真菌在液体环境中的生长特性。
作为自动化血液培养系统检测真菌血症的基础培养基成分。
四、注意事项
严格无菌操作：避免操作过程中引入污染。
抗生素添加时机：务必在培养基灭菌冷却后，于无菌条件下加入抗生素。
培养时间足够长：切勿过早丢弃阴性培养物。
双温度培养：对疑似双相真菌或某些病原体，需设置不同温度培养。
及时转种：一旦液体中有生长迹象，立即转种固体培养基进行分离纯化。
生物安全：操作可能含有病原真菌的培养物时，应在相应生物安全级别的实验室进行，做好个人防护。
总而言之，
沙堡弱液体培养基是利用其低pH和添加抗生素的选择性，以及高糖的营养性，专门用于在液体环境中促进真菌生长同时抑制细菌的培养基。它在临床真菌学诊断（尤其是真菌血症）和真菌研究中具有重要价值。正确配制、无菌添加抗生素、设定合适的培养条件和时间、及时观察和转种是成功使用的关键。
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