紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基的适用性检查与实验方法！
小杨 / 2024-12-27 09:26:45
一、培养基原理
明胶胰酶水解物提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，酵母浸出粉提供细菌生长所需的维生素等，葡萄糖提供碳源，结晶紫与脱氧胆酸钠联合可抑制多数革兰氏阳性细菌生长，氯化钠提供适宜的生理环境，中性红为酸碱指示剂，酸性变红，碱性变黄，琼脂为凝固剂。
细菌利用葡萄糖会产酸使pH下降，在中性红与结晶紫联合着色的作用下使菌落呈紫红色，同时利用葡萄糖产生的酸与脱氧胆酸钠反应形成沉淀，从而在菌落周围形成不透明沉淀圈。
二、所需菌种
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]
三、检查项目
促生长能力、指示能力、抑制能力（此项建议添加）
四、检查方法
平皿涂布法，同步使用对照培养基与待检培养基
五、菌液制备与稀释
挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每0.1ml含小于100cfu的菌悬液(稀释梯度：通常情况下为10-6)。金黄色葡萄球菌稀释成每0.1ml含不少于100cfu的菌悬液(稀释梯度：通常情况下为10-5)
六、培养基制备
被检培养基：称取培养基8.3g于200ml纯化水中,搅拌加热煮沸一分钟使完全溶解(如有浮沫，使用药匙置轻轻撇去)，冷至50℃左右倾注平板(每皿20ml左右)
对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。
将制备好的平板做好标记，条件允许的话置于30～35℃培养箱中预置约2～4h，目的是消除琼脂表面多余的水分，以便涂布操作。
七、实验方法
1、培养基阳性组：
（1）
大肠埃希氏菌、
铜绿假单胞菌：取稀释后的菌悬液0.1ml加于预制的平板中，涂布均匀（涂布操作注意避免菌液过多的存在于平皿边缘，当涂布过程感觉平板表面比较干燥时即认为涂布完成）。每种试验菌各做2个平行对照。
（2）
金黄色葡萄球菌：取稀释后的菌悬液0.1ml加于预制的平板中，涂布均匀，做一个平板即可，用于抑制能力检查。
2、培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液。
3、对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。
4、置30～35℃培养箱中培养18～24h。
5、计数并观察菌落特征。
八、计算方法
回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。
九、判定依据
若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，则判定合格。
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