人卵巢癌细胞紫杉醇耐药株的复苏与传代及冻存操作说明！
小杨 / 2024-08-16 08:52:40
细胞简介
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：A2780/ Taxol
细胞别称：A2780/ Taxol ；人卵巢癌细胞紫杉醇耐药株
种属来源：人
组织来源：卵巢
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞代数：10代以内
细胞规格：1x10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测：无
培养基：1640+10%FBS +P/S+Taxol
培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
运输方式：复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递
细胞货期：现货，1周左右
特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主
细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）
实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，水浴锅，离心机
实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，三抗
实验材料：T25 细胞培养瓶，需复苏的细胞，移液枪，枪头，离心管
实验步骤：
1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。
2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。
3、操作离心 ，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟
4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。
5、次日更换一次培养液，继续培养。
6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中
细胞传代操作说明（贴壁细胞）
实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机
实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗
实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管
实验步骤：
1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。
2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。
3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。
细胞传代操作说明（悬浮细胞）
实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机
实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清，三抗
实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管
实验步骤：
1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。
2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。
3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。
细胞冻存操作说明
实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机
实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO
实验材料：T25 细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔
实验步骤：
1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。
2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。
3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。
4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。
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