大鼠子宫内膜上皮细胞的应用及培养操作步骤！
小杨 / 2024-04-25 10:10:43
一、背景
大鼠子宫内膜上皮细胞指的是大鼠子宫内膜上皮细胞。子宫内膜是指构成哺乳类子宫内壁的一层，对动情素和孕激素都起反应，因此可随着性周期（发情周期、月经周期）发生显著的变化。子宫内膜覆盖着粘膜，由粘膜上皮与其下方的固有层所组成，而粘膜上皮为柱状上皮、立方上皮或复层柱状上皮。当动情素分泌时，各上皮细胞将长大、分裂使数目增多。
大鼠子宫内膜上皮细胞具有一些特性，包括组织来源于实验动物的正常子宫组织，细胞鉴定显示广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色为阳性，经鉴定细胞纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。在培养条件下，这些细胞以铺路石状、不规则形态贴壁生长。
1)复苏大鼠子宫内膜上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)大鼠子宫内膜上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)大鼠子宫内膜上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
大鼠子宫内膜上皮细胞可以用于益气化瘀方对子宫复旧不全大鼠子宫内膜细胞凋亡及Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达影响：
探讨益气化瘀方对子宫复旧不全大鼠子宫内膜上皮细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响,了解产后子宫内膜发生、增殖和演变的规律,为多种产后疾病的预防和治疗提供重要的指导依据。
方法：分娩后40只SD大鼠随机分为五组,每组别含有8只SD雌鼠,分别是：空白组、模型组、新生化颗粒组、益气化瘀方低剂量组、益气化瘀方高剂量组。分娩后,将过夜培养(生理盐水稀释成1.0×107个/mL)的大肠杆菌,分别对模型组、新生化颗粒组、益气化瘀方高、低剂量组进行造模,即子宫内接种大肠杆菌,子宫接种量为0.2mL。于造模成功后第一天,分别给予空白组、模型组、新生化颗粒组、益气化瘀方高、低剂量组连续7天灌胃处理,第8天腹主动脉采血后,取标本。通过光镜观察HE染色各组大鼠子宫切片的病理改变；采用TUNEL法检测Rat Endometrial Epithelial Cells细胞凋亡及免疫组化Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达。
结果：
(1)光镜下观察,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞连续性部分中断,且子宫内膜部分小血管扩张、充血,上皮细胞坏死脱落,间质疏松水肿,大量的炎性细胞浸润；新生化组及益气化瘀方高剂量组子宫内膜连续性好,无明显的上皮损伤,未见明显炎细胞浸润,间质致密；益气化瘀低剂量组大鼠子宫内膜可见少量连续性中断,内膜上皮损伤较轻,间质较致密,炎细胞少。
(2)与空白组比较,模型组的大鼠子宫内膜上皮细胞凋亡率明显升高(P<0.01)；与模型组比较,益气化瘀方高、低剂量及新生化组大鼠子宫内膜细胞凋亡率普遍降低(P<0.01)；与新生化组比较,益气化瘀方低剂量组大鼠子宫内膜细胞凋亡率高(P<0.01),益气化瘀方高剂量子宫内膜细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。
(3)与空白组比较,模型组Bcl-2表达明显减少(P<0.01),Bax表达增多(P<0.01)；给药后,与模型组比较,益气化瘀方低、高剂量及新生化组Bcl-2表达增多(P<0.01),Bax表达少(P<0.01)；与新生化组比较,益气化瘀方低剂量组Bcl-2表达减少(P<0.01),Bax表达增多(P<0.01),益气化瘀方高剂量组Bcl-2表达减少,Bax表达增多,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论：益气化瘀方可能通过上调Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白的表达,降低大鼠子宫内膜上皮细胞凋亡的发生,促进子宫内膜增生修复,从而促进产后子宫复旧。
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