C8-D1A鼠小脑细胞冻存与传代处理方法及应用！
小杨 / 2024-03-27 09:39:59
一、细胞简介
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：C8-D1A
种属：小鼠
年龄（性别）：
组织来源：
生长特性：贴壁
细胞形态：神经细胞样
背景描述
生长培养基：DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
用途：(种属鉴定正确)
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、收到冻存细胞的处理方法
1、37°C水浴预热培养基；
2、从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3、在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4、弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；
5、置于37°C，5%CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；
6、第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
三、细胞传代
1、当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；
2、37°C水浴预热培养基；
3、在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；
4、显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；
5、用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；
6、将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；
7、弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度大于1×104cells/cm2，混匀细胞悬液，确保均匀分布；
8、将培养瓶置于37°C，5%CO2的无菌培养箱中培养。
四、应用
用于超短波通过调节MK2/TNF-α通路抑制炎症反应促进脊髓损伤修复研究：
超短波（USW）治疗在临床上越来越受到广泛关注。USW作用广泛,可扩张局部血管,改善局部血液循环和组织营养,还可以消炎镇痛,提高神经肌肉兴奋性和生物活性。USW曾被报道对SCI有保护作用。炎性反应是脊髓继发性损伤的一个重要环节,一般持续时间较长,损伤范围较广。
其中最常见的炎性因子是TNF-α及IL-1β,在细胞毒性反应中起非常重要作用。丝裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2（MK2）及其介导的炎症参与SCI。MK2参与调控细胞周期、细胞迁移、肌动蛋白重构以及炎症反应等。MK2还参与关节炎、高血压、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、急性胰腺炎以及银屑病等疾病的炎症反应过程。
H2O2处理的C8-D1A星形胶质细胞中,MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达与对照组相比显著升高（P<0.01）。3、在体外细胞模型中,H2O2组和H2O2+USW组的MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达表达水平显著升高（P<0.01）。而与H2O2组相比,H2O2+USW组的MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与对照组相比,H2O2组和H2O2+USW组的细胞凋亡水平显著升高（P<0.01）。而与H2O2组相比,H2O2+USW组的细胞凋亡水平显著降低（P<0.01）。
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