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腐皮镰孢菌的培养方法与注意事项!
小杨 / 2021-11-23


                                            

腐皮镰孢(拉丁纲名: Fungi Imperficti)是一种壳霉目细菌,常见于农作物上。

一、菌种简介
平台编号:Bio-67924
规格:冻干物
拉丁属名:Fusarium Solani
菌株名称:腐皮镰孢菌
其他编号:AS 3.2889
培养基编号:14
培养温度:25~28℃
用途:茄病菌
分离源:苹果烂根
培养基信息
培养基编号:14
名称:Potato Dextrose Agar PDA (马铃薯、葡萄糖琼脂)
可用于培养菌种:适用范围:酵米面假单胞菌(酵米面黄杆菌)、白色链霉菌、烬灰链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、灰色链
备注:[Note]: Potato extract: Slice potatoes thin. Add 1000ml of water, immediately to prevent Oxidtion of juice and boil until soft. (approximately 30min.). Filter through cotton-cloth. Autoclave at 115℃ for 20 minutes.(注:取去皮马铃薯200克,切成小块,加水1000毫升煮沸30分钟,滤去马铃薯块,将滤液补足至1000毫升,加葡萄糖20克,琼脂15克,溶化后分装,15磅灭菌30分钟。)
用途:茄病菌
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用

二、菌株特点
1、该菌为需氧芽孢杆菌,细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色,细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低,在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好,表面粗糙呈米黄色。
2、适生长繁殖湿度为56-65℃,培养24h即可形成菌落,37℃下24h看不到菌落。
3、本生物指示剂载体为高级滤纸片,染菌量为5×105-5×106cfu/片或1×106cfu/片,封装在小纸袋内,热死亡时间为121℃,3.9 min阳性,19 min阴性;D10值1.3-1.9 min,符合美国药典第十一版规定标准。
4、该菌无毒,热抗稳定,在冰箱内4℃下保存一年抗力无明显下降,在常温(20℃左右)可保存1个月。

三、培养基
综合马铃薯培养基(PDA)
20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3g
Vitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然
20%马铃薯汁配制方法:马铃薯洗净去皮,取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块,将滤液补足 1000ml。 

四、保藏条件
斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。 

五、注意事项
1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取 0.3ml 适宜的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支平板或者斜面);
2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;
3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;
4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;
5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;
6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。
7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后 2 个月内联系,逾期不予受理;
8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
9)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。
10)西林瓶开封:用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部,在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖, 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞,用 75%酒精棉消毒瓶口部分,使用无菌吸管注入 0.2ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。

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