Growth Properties(生长特性):贴壁
Organism(生物体): 人
Source(来源): 胆管癌
Culturing:(培养)Complete growth medium:DMEM,90%;FBS,10%;双抗。
Temperature: 37.0℃
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Subculturing:(传代)Protocol:
1.Remove and discard culture medium.
2.Briefly rinse the cell layer with PBS solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
3.Add 1.0 ml of 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed(about 3-5 min).
4.Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal.
5.Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.
6.Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
7.Incubate cultures at 37°C.
Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:2 to 1:4 is recommended
Medium renewal: 2 times per week
Preservation:(冻存)Freeze medium: FBS/NBS, 92%; DMSO, 8%
Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
三、常见问题及解决方案:
1、 细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以离心去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察。
2、对于生长缓慢的贴壁细胞:可采用适当的提高培养基中血清浓度,或隔数日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
3、对于生长不均的贴壁细胞:在培养过程中若出现细胞分布明显不均时(即某一区域细胞已重叠生长,而旁边则为一块空白),此时可将细胞进行消化,重新打散,贴壁,加入新培养基进行培养。
4、使用不同胰酶的消化时间相差较大,总体以细胞收缩变圆并成片脱落为准终止消化。胰酶活力较强的时候需要使用5-6倍胰酶体积的完全培养基终止,且终止后离心弃上清后,用新鲜培养基重悬细胞接种。
5、细胞收货后尽快拍照留存,以便处理售后问题,若无相关细胞照片,将无法提供免费重发服务。
6、细胞有问题请尽快与我方联系,并提供相关照片,我方会积极为您提供技术支持。如客户在出现问题的时候不经我方同意,擅自将细胞遗弃,将视为客户自身失误导致细胞出现问题,我方有权不提供重发服务。
7、使用干冰发货的细胞,均发两支冻存细胞。请不要一起复苏,仅复苏一支,将一支存放在-80冰箱或者液氮里。如复苏有问题,及时联系我方,并在我方指导下复苏另外一支。若客户同时复苏两支,且细胞状态不理想,要求售后,我方无法提供免费重发服务。