假单胞菌属的形态特性与临床意义及微生物学检验!
小杨 / 2023-07-19 09:34:20


一、分类

假单胞菌属归于假单胞菌科,有200余种细菌,其DNA的G+C的摩尔分数为58%~71%,主要包括铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) ,荧光假单胞菌(P.fluorescens)、恶臭假单胞菌(P.putica)、斯氏假单胞菌(P.stutizeri)、产碱假单胞菌(P.alcaligenes)等。

二、生物学特性

假单胞菌属为革兰阴性杆菌,菌体直或微弯,无芽胞、无荚膜,有单鞭毛(铜绿假单胞菌、斯氏假单胞菌、产碱假单胞菌)或丛鞭毛(荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌),运动活泼。

本属细菌专性需氧,生长温度范围广,最适生长温度35℃(荧光假单胞菌25℃),少数细菌可在4℃(荧光假单胞菌)或42℃(铜绿假单胞菌、斯氏假单胞菌)生长,可以此来鉴别细菌。细菌生长的pH 5.0~9.0,最适pH值为7.0。营养要求不高,在普通培养基上均可生长,可产生多种水溶性色素,主要有绿脓素(pyocyanin)和青脓素(pyoverdin),青脓素在360 nm紫外光下可发出黄绿色荧光,故又称荧光素。各种假单胞菌产生的色素见表17-2。细菌在液体培养基中呈混浊生长,常在其表面形成菌膜。在麦康凯平板上生长良好,各种菌在血平板上形成不同的菌落特征,根据生长特性可进行初步鉴定。

铜绿假单胞菌在普通平板上形成的菌落扁平湿润、大小不一、边缘不整齐、常呈融合状生长,所产生的绿脓素和荧光素使培养基被染成蓝绿色或黄绿色,从临床标本中分离的菌株有80%~90%可产生绿脓素或荧光素。在血平板上生长后有生姜样气味,形成扁平湿润、有金属光泽的菌落,常呈β溶血。在麦康凯琼脂培养基上,24 h可形成半透明菌落,48 h后菌落中心呈棕绿色。来自肺囊性纤维化患者的菌株常形成M型菌落。

荧光假单胞菌在血平板上30℃孵育24 h后形成灰白色、扁平稍隆起、湿润、光滑、边缘整齐的菌落,无溶血,挑取菌落呈黏丝状。

斯氏假单胞菌在血平板上24 h长出1 mm大小菌落,大多数菌落干燥、有皱纹、粗糙、扁平,淡黄色或黄棕色,坚韧而黏附平板;少数菌落光滑、湿润,大部分产生透明溶血环。多次转种后光滑型菌落增多,呈迁徙生长及扩散。

在血平板上产碱假单胞菌和恶臭假单胞菌都形成光滑、湿润、边缘整齐的灰色菌落,无溶血。

三、临床意义

假单胞菌属分布广泛,土壤、水和空气中均有存在,属于条件致病菌。人感染主要来源于环境、污染的医疗器械、输液或注射等,成为医院感染的主要病原菌。在人类非发酵菌感染中,假单胞菌属占70%~80%,主要为铜绿假单胞菌,其次为恶臭假单胞菌、荧光假单胞菌等。

铜绿假单胞菌不仅广泛存在于环境中,也存在于正常人体的肠道、皮肤及外耳道,当宿主正常的防御机制被改变或损伤时,如烧伤、留置导尿管、气管切开插管等,以及免疫机制缺损时,如肿瘤患者、器官移植患者等,可导致皮肤、呼吸道、泌尿道、眼部等感染。当细菌毒力强、数量多而机体抵抗力降低时,细菌可在血中繁殖引起败血症、脑膜炎。

从伤口、痰、胸腔积液、尿或血液中可分离出荧光假单胞菌。由于荧光假单胞菌具有嗜冷性,可在血库储存的血中繁殖,若输入含有此种细菌的库存血液或血制品,可导致败血症、感染性休克或血管内凝血等严重后果,其内毒素的磷脂部分可导致输血后不可逆的休克。

恶臭假单胞菌为鱼的一种致病菌,常从腐败的鱼中检出,也可作为人类咽部的正常菌群,是人类少见的条件致病菌,偶从少、类尿道感染、皮肤感染和骨髓炎标本中分离出,分泌物有腥臭味。恶臭假单胞菌感染通常病情较重,因为该菌自溶后释放出内毒素而致中毒症状。

斯氏假单胞菌在人类的呼吸道、泌尿道均可发现,为条件致病菌,可引起原发性或继发性感染,如呼吸道感染、中耳炎、关节炎、尿路感染及败血症等。

产碱假单胞菌广泛存在于多种水源中,是医疗用水污染的主要原因。产碱假单胞菌如污染新生儿温箱湿化用水和氧气湿化用水,极容易导致新生儿呼吸道感染甚至败血症等。产碱假单胞菌还可引起化脓性脑膜炎、尿道炎、肺炎等感染性疾病。

四、微生物学检验

1、检验程序非发酵菌检验程序见图17-1。

图17-1非发酵菌检验程序

2、标本采集假单胞菌属感染常见标本有血液、脑脊液、胸腹水、脓液、分泌液、痰、尿液等。进行医院感染监测时,标本主要为病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活用品。

3、直接显微镜检查取标本直接涂片、革兰染色,镜下可见革兰阴性杆菌,散在排列,无芽胞。

4、分离培养临床感染标本一般直接接种于血平板及麦康凯平板,血液、脑脊液标本经增菌后再转种于血平板。

5、鉴定假单胞菌属的主要特征:革兰阴性杆菌,专性需氧,在血平板和麦康凯培养基上生长良好,通常产生明显的水溶性色素。氧化酶阳性,葡萄糖氧化发酵试验(O/F试验)为氧化型或产碱型,端生单或丛鞭毛,据此可与非发酵菌其他属相区别。进一步做系列生化试验进行菌种鉴定。具体见表17-3。

表17-3临床常见假单胞菌的鉴定特征

注:+表示90%以上阳性;一表示90%以上阴性;V表示不定。

在临床微生物实验室,假单胞菌属细菌的鉴定常采用商品化的试剂盒,以及全自动或半自动的细菌鉴定系统。

从临床标本中分离出铜绿假单胞菌,需要排除污染,从患者血液及无菌体液、尿液中分离到本菌,特别是反复检出者,结合临床表现即可确定为病原菌感染。需连续三次痰培养阳性才能确立铜绿假单胞菌下呼吸道感染,如患者无感染的临床表现,虽然分离到铜绿假单胞菌亦应作为正常菌群。

6、药物敏感试验 假单胞菌属的细菌对有些抗生素天然耐药,临床治疗假单胞菌感染的抗菌药物主要有三类:β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类。按美国临床实验室标准研究所(CLSI)推荐,铜绿假单胞菌药敏试验可选用Kirby-Bauer法。

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