M109小鼠肺癌细胞系的特点与培养及应用研究！
小杨 / 2024-04-18 08:55:32
一、背景
M109小鼠肺癌细胞系是一种来源于C57BL/6小鼠的肺癌细胞系，属于鳞状细胞癌。该细胞系具有高增殖能力、易形成肿瘤球和转移等特点，被广泛应用于肺癌相关研究。
M109小鼠肺癌细胞系的建立始于1980年代，当时研究人员从一例C57BL/6小鼠肺癌组织中分离出肿瘤细胞，并成功建立了该细胞系。目前，M109细胞系已经成为一种常用的肺癌研究模型，被广泛应用于肺癌的发生机制、肿瘤生物学特性、药物筛选和治疗等方面。
高增殖能力：M109细胞系具有较快的生长速度和较高的增殖能力，可以在体外持续传代。
易形成肿瘤球：M109细胞系在培养过程中容易形成肿瘤球，这是一种由单个肿瘤细胞或少数肿瘤细胞聚集形成的球状结构。肿瘤球的形成有助于维持肿瘤细胞的干细胞特性和生长信号通路的激活。
转移能力强：M109细胞系具有较强的转移能力，可以通过血液或淋巴系统转移到其他部位形成转移瘤。
多药耐药性：M109细胞系具有多药耐药性，即对多种化疗药物产生抗性。这使得该细胞系在药物筛选和治疗研究中具有一定的应用价值。
总之，M109小鼠肺癌细胞系是一种重要的肺癌研究模型，具有高增殖能力、易形成肿瘤球和转移等特点。通过深入研究该细胞系，可以为肺癌的发生机制、肿瘤生物学特性、药物筛选和治疗等方面提供重要的实验依据。
1)复苏M109小鼠肺癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)M109小鼠肺癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)M109小鼠肺癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
四、应用
制备一种pH/还原响应性FA功能化胶束,在壳寡糖(Chitosan oligosaccharide,CSO)上接枝FA、还原敏感胆固醇(Reduced sensitive cholesterol,CET)及pH敏感2’3-二甲基马来酸酐(DMMA)得到FA修饰的CET-CSO-DMMA(FCSD)。通过超声法由FCSD材料包载DOX制备pH/还原响应性FA功能化阿霉素(Doxorubicin,DOX)胶束(FCSD/DOX)。
本研究提出一种Dex诱导FRα放大效应及免疫抑制联合FA功能化阿霉素胶束增加对肿瘤杀伤的序贯疗法。在序贯疗法中,一方面,Dex选择性增加M109小鼠肺癌细胞系细胞表而FRα的表达,降低血清免疫球蛋白含量,减弱天然IgM对FCSD/DOX肿瘤靶向性的影响;另一方面,生理条件下FCSD/DOX表面的负电荷在肿瘤细胞外弱酸性(ExtracellularpH,pHc)条件下,电荷翻转,促进FA功能化DOX胶束的摄取,到达胞内后,胞浆内GSH刺激下CET的二硫键断裂,胶束结构破裂,快速释放所包载的DOX。
结果表明,序贯疗法的抑瘤率为81.01%,与单独使用FCSD/DOX相比,对M109小鼠肺癌细胞系抑瘤效果明显增强。因此,我们应重新认识地塞米松和FA功能化NDS联合对FRα阳性肺癌患者的序贯疗法。
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