白色假丝酵母的检查与培养方法及注意事项！
小杨 / 2021-01-15 08:41:14
白色假丝酵母又称白色念珠菌（Monilia albican 或 Canidia albicans），是一种真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病。
一、菌种简介
平台编号：bio-52835
规格：冻干物
拉丁属名：Candida albicans
菌种名称：白色假丝酵母
拉丁文名：Candida albicans
其他编号：CMCC98001
培养基编号：13
培养温度：25-28℃
培养时间：48h
用途：研究
相关的培养基详细信息如下：
培养基编号：13
名称：Wort Agar （麦芽汁琼脂）
适用范围：克鲁斯假丝酵母、郎比可假丝酵母、解脂假丝酵母、马其顿假丝酵母、拟热带假丝酵母、粗壮假丝酵母
备注：Dilute the world (without hop) to 12 Brix. Add 15g agar into 1000ml of the diluted word..Melt the agar by heating, then distribute the medium into tubes. Autoclave at 110 for 30 minutes. (将发酵啤酒的原料（未加酒花），稀释至12柏林，加琼脂15克，溶化后分装。15磅灭菌30分钟。)
保藏条件：斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。
二、菌株特征
本菌细胞呈圆形或卵圆形，很象酵母菌，直径3～6μm，比葡萄球菌大5～6倍，革兰阳性，但着色不均匀。出芽方式繁殖。在病灶材料中常见真菌细胞出芽生成假菌丝，假菌丝长短不一，并不分枝，假菌丝收缩断裂又成为芽生的菌细。
此菌正常情况下呈卵圆形，白假丝酵母菌与机体处于共生状态，不引起疾病。当某些因素破坏这种平衡状态，白假丝酵母菌由酵母相转为菌丝相，在局部大量生长繁殖，引起皮肤、黏膜甚至全身性的假丝酵母菌病。当机体的正常防御功能受损导致内源性感染，如创伤、抗生素应用及细胞毒药物使用致菌群失调或黏膜屏障功能改变、皮质激素应用、营养失调、免疫功能缺陷等。白假丝酵母菌为双相菌，正常情况下一般为酵母相，致病时转化为菌丝相。因此在细胞涂片或组织切片中发现假菌丝是假丝酵母菌感染的重要证据。
三、生存环境
念珠菌对热的抵抗力不强,加热至60℃1小时后即可死亡。但对干燥、日光、紫外线及化学制剂等抵抗力较强。 在假丝酵母菌中80%～90%病原体为白假丝酵母菌10%～20%为光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌，热带假丝酵母菌等。 白假丝酵母菌为条件致病菌，10%～20%非孕妇女及30%孕妇阴道中有此菌寄生但菌量极少，呈酵母相，并不引起症状。念珠菌生长最适宜的pH值为5.5，阴道的弱酸性环境能保持阴道的自洁功能，正常人为3.7-4.5，但阴道的弱酸性改变为pH5.5后，假丝酵母菌大量繁殖，并转变为菌丝相，才引发阴道炎症状。因此用pH4弱酸配方的女性护理液除了适合日常的清洁保养外，治病期间使用弱酸配方的女性护理液对霉菌的生长繁殖会有抑制作用。
四、检查方法
1、直接检查法是临床最常用检验方法，阳性检出率为60%。其优点是简便，快捷。 (1)盐水法 (2)氢氧化钾法
2、革兰染色法此方法阳性检出率为80%。取分泌物涂片、固定后，革兰染色，置显微镜下观察，可见成群革兰染色阳性的卵圆形孢子和假菌丝。
3、培养法如疑为假丝酵母菌性阴道炎，多次检查均为阴性，可作真菌培养。
4、菌种鉴别实验如需确定分辨假丝酵母菌的种类，必须进行发酵试验、同化试验，并就其菌落形态特征进行鉴别。
5、测定pH 值具有重要鉴别意义，若pH 值<4.5，可能为单纯假丝酵母菌感染，若pH 值>4.5，并且涂片中有多量白细胞，可能存在混合感染。
6、对于年老肥胖或久治不愈患者，应查尿糖、血糖以寻找病因。 其他辅助检查：无特殊表现。
五、培养方法
本菌在血琼脂或沙保氏琼脂上，37℃或室温孵育2～3日后，生成灰白乳酪样菌落，涂片镜检，可看到表层为卵圆形芽生细胞，底层有较多假菌丝。若接种于4%玉蜀黍琼脂上，室温孵育3～5日可见假菌丝，芽生孢子，厚膜孢子。
六、注意事项
1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，参照“开管说明”，用无菌吸管吸取0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，若接种液体培养基，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；
2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；
3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；
4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；
5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；
6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和中国微生物菌种查询网联系。
7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；
8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。
9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。