一、目的要求:
本实验是通过简单的生化测定来了解苏云金杆菌的生化鉴定技术。
鉴定苏云金杆菌的生化指标是:V、P反应,卵磷脂酶,蛋白水解,吐温酶,水杨素,七叶灵、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、几丁质酶、精氨酸脱羟酶等。
二、实验材料:
1、天平
2、电炉
3、药勺
4、量筒
5、烧杯
6、pH试纸
7、高压锅(手提式)
8、接种环
三、实验内容:
1、糖利用:
蛋白胨 1%
琼脂 2%
蔗糖(甘露糖) 1%(水杨素为0.5%)
1%酸性复红水溶液 0.5%
蛋白胨加热溶于水中,加入酸性复红水溶液。分别加入一种糖加热溶解,以不加糖的蛋白胨作对照。分装试管,调pH至7.58磅灭菌30分钟。
接种后于30℃恒温培养检查产酸情况,若培养基变红者为正反应。
2、七叶灵利用:
牛肉膏 1%
七叶灵 0.5%
琼脂 2%
另配5%三氯化铁水溶液单独灭菌。培养基溶后,先将三氯化铁每皿滴入2滴,后倒平板混匀。凝固后电接菌种,30 ℃培养3-5天。菌苔周围出现深褐色区为阳性反应。
3、V、P反应:
蛋白胨5克 葡萄糖5克 NaCl 5克 蒸馏水 1000毫升
分装试管 8磅30分钟灭菌
接菌后于37 ℃培养24小时,每管加入4%KOH溶液10-20滴,再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后,用力振荡。然后置37 ℃下保温0.5小时。培养物出现红色即为V、P正反应,并设未接种的试管为对照。
4、淀粉水解试验:
牛肉膏 5克 NaCl 5克 可熔性淀粉 5克 琼脂 10克 蒸馏水 1000毫升
将试验菌点种于平板上,徒长出菌落后,收Lugoc氏碘液倾注于平板表面,菌落四周有透明圈者为阳性放应。
5、菌膜形成试验:
肉汤试管接种,30。C静止培养24小时后观察菌膜形成情况及摇动后膜破粹情况。
6、卵磷脂酶试验
蛋白胨1% 酵母膏 0.3% NaCl 0.5% 琼脂 2% 卵黄2-3% pH 7-7.2
用75%酒精将新鲜鸡蛋进行表面消毒,并用经火焰灭菌的镊子将蛋两端各打一个孔,倾去蛋清,然后用无菌5ml吸管取出卵黄,加至触化后冷却至50。C左右的培养基中,使卵黄含量为培养基总体积的2~3%。混匀后倒平板,点接菌种24小时后观察,菌液边缘出现混浊圈者表示卵鳞酯酶为阳性。
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