SW837人结直肠腺癌上皮细胞的特点及培养操作！
小杨 / 2024-02-16 07:52:10
一、背景
二、该细胞系具有以下特点
来源：SW837细胞系来源于人结肠癌组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。
形态特征：SW837细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。
生长特性：SW837细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中稳定生长。
侵袭转移特性：SW837细胞具有较强的侵袭和转移能力，可通过Transwell小室实验等方法检测其侵袭和转移能力。
其他特性：SW837细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究结肠癌细胞增殖相关疾病的模型。
1)复苏SW837细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)SW837细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)SW837细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
四、应用
本研究旨在探索MST1调控直肠癌细胞生长的机制。研究MST1对直肠癌细胞凋亡、增殖和迁移的影响是否通过干扰线粒体自噬来实现,并进一步探讨MST1影响线粒体自噬的分子机制,为靶向治疗直肠癌提供新策略。
研究方法：体外实验:明确MST1对直肠癌细胞系SW 837生物学行为的影响及可能机制。分三部分。
通过Western blots技术检测直肠癌细胞系SW 837和正常肠粘膜细胞FHC中MST1的表达情况。通过腺病毒转染技术,使SW 837中MST1水平显著上升,建立过表达MST1稳定细胞系。通过MTT法,TUNEL法、BrdU法和Transwell法分析MST1对直肠癌细胞凋亡、增殖和迁移的影响。通过Western blots技术检测凋亡、增殖和迁移相关蛋白的表达水平。
通过JC1染色,mPTP开放实验、Cyt-c免疫荧光以及ATP和ROS水平测定MST1对线粒体功能的影响。通过Western blots技术检测线粒体自噬相关蛋白,并利用线粒体和溶酶体的免疫荧光共染色分析MST1对线粒体自噬的影响。
利用线粒体自噬激活剂FCCP、JNK抑制剂SP600125(SP)和P53siRNA,通过Western blots技术、免疫荧光等方法来探讨MST1与线粒体自噬之间可能的信号通路。
体内实验：验证MST1在体内对裸鼠直肠癌细胞移植瘤生长的影响。将对照组SW 837和过表达MST1的SW 837移植到裸鼠腋部皮下,45天后处死,取出移植瘤,测量移植瘤体积和重量。通过Western blots、qRT-PCR方法检测移植瘤组织中JNK、Caspase 3和Caspase 9的表达情况及Cyclin D和Cyclin E的mRNA水平。同时对移植瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。
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