一、背景
大鼠胰岛细胞采用胶原酶灌注消化法结合密度梯度离心法制备而来，细胞经DTZ染色鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
大鼠胰岛细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。
α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌生长抑素，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。
胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整、生理功能稳定和足够长的存活时间。胰岛占胰腺总质量的1%-2%，每个胰岛大概含有1000个细胞。
胰岛移植可消除常规治疗产生的严重低血糖症状，具有创伤小及并发症少等优点，是最有前景的Ⅰ型糖尿病治疗方案。移植胰岛的获得需经过供体筛选、胰腺消化、胰岛分离纯化及结果鉴定等步骤，分离纯化效果取决于原料及操作方法的选择。
二、应用
用于降糖三黄片对大鼠胰岛细胞凋亡通路影响的研究：
通过观察不同浓度剂量的降糖三黄片对IL-1β诱导的原代大鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨降糖三黄片对死亡受体Fas/FasL的作用途径,探索降糖三黄片治疗和改善胰岛细胞损伤和凋亡的作用机制。
方法：使用胆总管逆行灌注、胶原酶V原位消化及Ficoll梯度离心方法从正常SD大鼠胰腺分离纯化获得原代胰岛细胞；IL-β作用胰岛细胞24h后,使用MTT法选择对胰岛细胞具有保护作用的降糖三黄片有效药物浓度；RT-PCR法检测降糖三黄片对IL-1β诱导下细胞内FasmRNA、BaxmRNA、Bcl-2mRNA表达的影响；Western Blot法检测降糖三黄片对IL-1β干预后细胞内Fasl、Cyto-c、capase-3蛋白表达的影响。
结果：1、本实验中使用胆总管逆行灌注、胶原酶V原位消化及Ficoll梯度离心方法从正常SD大鼠胰腺分离纯化获得胰岛细胞,并选用11.lmmol/L葡萄糖浓来度培养细胞。通过测量胰岛素释放量,可制备出细胞形态及功能良好的原代大鼠胰岛细胞。
2、IL-1β作用于胰岛细胞24h后,采用MTT法选择对胰岛细胞具有保护作用的降糖三黄片有效药物浓度,遴选出低（50μg/ml）、中（100μg/ml）、高（200μg/ml）三组剂量。
3、IL-1β与胰岛细胞和共同培养24h后RT-PCR检测发现与空白对组相比IL-1β刺激下胰岛细胞中FasmRNA及BaxmRNA的表达升高、Bcl-2mRNA的表达降低（P<0.05）。
北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！