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    硝酸盐胨水培养基的实验方法与应用!


    一、背景
    硝酸盐胨水培养基用于鉴别绿脓杆菌分解硝酸盐产气试验(GB15979-2002,《中华人民共和国药典》2005年版,化妆品卫生规范微生物检验方法2007版)。
    原理:蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子;某些细菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐,并将亚硝酸盐分解产生氮气。
    配方(每升):蛋白胨10g酵母膏粉3g硝酸钾2g亚硝酸钠0.5g,最终pH7.2±0.2。

                                                                 

    二、使用方法
    1、称取硝酸盐蛋白胨水培养基(硝酸盐胨水培养基)15.5g,加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装于带有小倒管的试管中,115℃高压灭菌20min。
    2、取待检菌的新鲜纯培养物,接种于硝酸盐胨水培养基中,置36±1℃培养1—4d。
    3、在培养基的小倒管内有气泡产生者,为阳性反应;无气泡产生者为阴性反应。

    三、实验方法
    1、培养基阳性组:取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中,每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中,用于计数,每种细菌做两个平板。
    2、培养基阴性组:即空白对照,即不添加菌液。
    3、接种量计数:步骤1中的平皿中,细菌倾注胰酪大豆胨琼脂培养基,霉菌和白色念珠菌倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。
    4、培养条件:
    无菌检查:20~25℃培养14天或直至出现浑浊(不超过14天)
    MPN计数:30~35℃培养箱中培养3天
    控制菌检查:30~35℃培养箱中培养18~24小时

    四、应用
    用于贫营养好氧反硝化菌群GNY净化微污染水源水试验研究:
    针对微污染水源水的氮源污染问题,深入研究了贫营养好氧反硝化细菌的脱氮特性,在课题组前期分离的23株贫营养好氧反硝化细菌中筛选并组合得到了高效好氧反硝化功能菌群,讨论了优势生态菌群的最佳投菌量和对微污染水源水的脱氮效能的影响。
    结果:(1)从水库沉积物中筛选到一株好氧反硝化细菌Acinetobacter sp.Sxf14,对该菌株脱氮特性进行研究,并将其接种到C/N(总有机碳与总氮的比值)为1.2的微污染水库源水中,以探究其对实际源水总氮的去除效果.结果显示:Sxf14能以硝酸盐和亚硝酸盐为唯一氮源进行好氧反硝化.反应48 h后,NO3--N和NO2--N的去除率分别达74.84±0.86%和40.52±1.49%,TN去除率最高达到65.07±1.56%和41.33±0.98%;72 h内,微污染水库源水的TN浓度由2.46±0.02 mg/L降到1.68±0.01 mg/L,去除率达到31.7±0.14%。
    因此,该菌株具有反硝化能力,能承受较低的碳氮比,降低微污染源水中的氮素,本研究可为微污染水体的菌剂修复技术提供科学依据。
    (2)采用菌源组合构建出优势贫营养好氧反硝化功能菌群GNY(G107+N299+81Y),研究不同碳氮比对组合菌群脱氮性能的影响,结果表明:随着碳氮比值的增大,好氧反硝化菌的反应速率逐渐增强,功能菌群能够适应贫营养环境,当C/N为3,硝氮去除率达到57.18%,总氮去除率达到43.52%,且能维持较长时间的好氧反硝化活性。
    (3)将生态菌群GNY分别接入水库纯源水和灭菌后的水库源水小试中,NO3--N最高去除率达到35.9%,TN最高去除率达到46.78%;在纯源水培养基中,NO3--N最高去除率达到27.97%,TN最高去除率达到43.58%,投菌组比对照组的硝氮去除率高15.26%,,总氮去除率高17.38%;说明该生物菌群可以适应源水贫营养环境,并能够有效地降低微污染水体中的氮素。

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