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    MDCK无血清培养基的应用!


    一、背景

    MDCK无血清培养基用于MDCK细胞的传代培养。在整个细胞培养过程中,不需添加血清或替代物。MDCK细胞可直接转入MDCK细胞无血清培养基培养,不需要经过血清浓度逐步降低的细胞驯化过程。

    MDCK细胞无血清培养基是一款专门用于培养MDCK细胞的无血清培养基。

    MDCK细胞无血清培养基中不含胎牛血清成分,细胞培养过程中也不需要添加任何血清,无血清培养的MDCK细胞可达到完全培养基(DMEM+10%FBS)培养的状态,连续传代50代,细胞特性无改变,生长速率优于完全培养基。MDCK细胞的倍增时间小于20小时。

    MDCK细胞无血清培养基化学成分限定,在流感病毒分离中能排除血清中类淀粉蛋白P等物质对病毒吸附的影响,同时,细胞可以直接转入无血清培养基中培养,不需要经过血清浓度逐步降低的驯化过程。

    MDCK是S.H.MADIN于1958年9月建成bai,来源于考克斯班尼犬肾脏,该肾du脏细胞原代培养zhi时其形态类似于成纤维细胞,经过胰蛋白酶和EDTA混合消化液的连续6次消化法纯化而上皮样细胞,每次纯化间隔时间为7D。培养中MDCK细胞具有远段肾小管与集合管,来源细胞的分化特性。MDCK细胞株至少有两种细胞类型,一种命名为C5A,其在含I型胶原的培养物中生长时,能分泌液体,导致囊肿形成,但在塑料面的培养低物上培养时,能分泌液体,却不能形成囊肿,另一种细胞正好相反。

    二、应用

    用于用于流感疫苗生产的MDCK细胞无血清单细胞悬浮培养体系的开发研究:

    传统的流感疫苗生产多采用鸡胚培养过程,但该生产过程具易受微生物污染、内毒素残余量高、对流感大流行应急能力差等缺点,因此动物细胞制病毒疫苗工业的发展变得尤为重要。MDCK细胞具有培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等特点,是适合用作流感病毒疫苗生产的重要细胞系之一。

    在自制无血清培养基Self-SFM基础上成功开发了适合MDCK细胞无血清培养的培养基MDCK-SFM,细胞比生长速率、细胞活力和细胞密度与有血清培养过程相当。通过调整MDCK-SFM培养基成分,研制出了适合MDCK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基MDCK-SHP和低蛋白无血清培养基MDCK-SLP,成功驯化出了适合无血清单细胞悬浮培养的细胞ssf-MDCK。

    在无血清培养基MDCK-SHP中培养ssf-MDCK细胞,细胞密度可达38.05×105cells/mL,最大比生长速率可达0.056 h-1;在低蛋白无血清培养基MDCK-SLP中细胞密度可达22.94×105cells/mL,最大比生长速率可达0.050 h-1。

    另外,利用该MDCK细胞无血清悬浮培养体系,对MDCK细胞生产流感病毒疫苗过程中的操作参数进行了初步优化,在整个细胞培养和病毒疫苗生产过程中无需更换培养基,在病毒感染过程中需添加TPCK-胰酶,感染时TOI为50 h,MOI为0.1,感染病毒48 h后收获病毒液,在无血清培养基MDCK-SHP和低蛋白无血清MDCK-SLP中获得的病毒液的TCID50滴度值分别为1010.85±0.81 TCID50/mL和1011.43±0.73 TCID50/mL。

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